ICS 65.020.30 B 44 中华人民共和国国家标准 GB/T 14926.21—2008 代替GB/T14926.21—2001 实验动物 兔出血症病毒检测方法 Laboratory animalMethod for examination of Rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) 2009-03-01实施 2008-12-10发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国 国家标准 实验动物免出血症病毒检测方法 GB/T14926.21—2008 * 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址 www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本880X12301/16 印张0.5 字数9千字 2009年2月第一版 2009年2月第一次印刷 * 书号：155066·1-35766 如有印装差错 由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 举报电话：（010)68533533 GB/T14926.21—2008 前言 GB/T14926《实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法。 本部分自实施之日起代替GB/T14926.21一2001《实验动物 免出血症病毒检测方法》。 本部分与GB/T14926.21—2001相比主要技术差异如下： a）增加兔出血症病毒核酸(RHDV)核酸检测方法； b）确定免免疫接种RHDV疫苗后的血清抗体合格判定标准。 本部分由全国实验动物标准化委员会提出并归口。 本部分起草单位：全国实验动物标准化技术委员会 本部分主要起草人：贺争鸣、付瑞、田克恭。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T14926.21—1994,GB/T14926.21—2001。 GB/T14926.21—2008 实验动物 免出血症病毒检测方法 1范围 本部分适用于兔RHDV抗原、抗体和病毒核酸的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T14926的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB/T14926.53实验动物血凝试验 GB/T14926.54实验动物血凝抑制试验 3原理 血凝试验（HA）：在一定条件下，RHDV能凝集人“O”型红细胞，产生可见的凝集反应。根据这一 特性检测免肝组织中有无RHDV抗原。 血凝抑制试验（HAI)：在一定条件下,RHDV凝集人“O"型红细胞的能力可被特异性抗体所抑制。 根据这一特性检测免血清中有无RHDV抗体。 核酸检测：根据RHDVVP60基因序列保守的特点，设计特异引物，扩增目的片段，检测免组织中 的RHDV核酸。 4主要试剂与器材 4.1试剂 4.1.1血凝素 人工感染或自然发病的兔肝组织，经研磨制成10%悬液，3000r/min离心10min而获得的上 清液。 4.1.2阳性血清 RHDV抗原免疫或RHDV自然感染恢复后的免血清 4.1.3阴性血清 无RHDV感染、未经免疫的兔血清。 4.1.4人“0”型红细胞。 4.1.5缓冲液与溶液 4. 1.5. 1 PBS(pH7.4) NaCl 8 g KCI 0.2 g Na,HPO, :12H,O 2.83 g KH,PO4 0.2 g 去离子水 1 000 mL 4.1.5.2 2TRIzol Reagent。 1