ICS 65. 020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28089—2011 葱类黑粉病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Urocystis cepulae Frost 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 28089—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫 局、中华人民共和国湖北出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：邵秀玲、赵汗青、王英超、种焱、吴兴海、张治宇、江丽辉、高文娜、张京萱、宋涛 罗志萍， I GB/T28089—2011 葱类黑粉病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了葱类黑粉病菌检疫鉴定方法。 本标准适用于洋葱等葱属中葱类黑粉病菌的检疫和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法 SN/T1157进出境植物苗木检疫规程 SN/T1809进出口植物种子检疫规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 孢子球 sporeballs 由一至多数冬孢子集结而成，易分开成单独的冬孢子或坚固而不易分离，外层有浅色的较小的不孕 细胞包围。 4 葱类黑粉病菌基本信息 中文名：葱类黑粉病菌。 学名：Urocystis cepulae Frost 1877 异名：Tuburcinia cepulae（Frost)Liro 1922, Tuburcinia magica （Pass.)Liro 1922,Urocystis colchicivar.cepulaeCooke1877,UrocystismagicaPass.1875。 病害英文名：onionsmut。 属真菌界Fungi，担子菌亚门Basidiomycotina，黑粉菌纲Ustilaginomycetes，条黑粉菌目Urocys- tales，条黑粉菌科Urocystaceae，条黑粉菌属Urocystis。 葱类黑粉病菌的其他信息参见附录A。 5方法原理 经现场查验，实验室分离培养，根据病原菌的形态特征、生物学特性，结合寄主范围进行结果判定 6仪器和用具 6.1生物显微镜（具油镜镜头，具测量功能）、具透射光源的体视显微镜（放大倍数不低于50×）。 1 GB/T 28089—2011 6.2 超净工作台。 6.3 电子天平。 6. 4 光照恒温培养箱。 6.5 酒精灯。 6.6 高压灭菌器。 6.7 培养皿。 6.8 医用手术剪、镊子。 6.9 烧杯（500mL）。 6.10 试管（直径12mm）。 6.11 载玻片、盖玻片。 6.12 量筒（500mL）。 6.13 微量可调加样器（5uL~20uL）。 6.14 刻度离心管：10mL或20mL。 6.15 加样器枪头（2μL～20μL）。 6.16 三角瓶（250mL）。 6. 17 席尔氏浮载剂（见GB/T18085） 6.18 干热灭菌器。 6. 19 往复式振荡器。 6.20 涡旋振荡器。 7 主要试剂 7. 1 蒸馏水。 7.2 吐温-20。 7. 3 1%的次氯酸钠溶液。 7. 4 洋葱琼脂培养基。 8 现场检测 8. 1 抽样方法 棋盘式、五点式或随机抽样。 8.2 抽样数量 8.2.1种子 8. 2. 2 洋葱、大蒜等鳞茎 对洋葱、大蒜等鳞茎按SN/T1157进行抽样。 8. 3 症状检查 对洋葱、大蒜等鳞茎，注意检查鳞茎上是否有典型的黑粉症状，挑选个头小（孢子在鳞茎上产生可能 引起鳞茎变小）、干腐的鳞茎，洋葱鳞茎常形成铅色到黑色的条斑；洋葱叶片上形成铅色到黑色的轻微变 2 SAG GB/T28089—2011 厚的条斑或水泡，当增厚区域较大时可引起子叶向下弯曲。随着叶片基部病斑的扩大，病斑破裂漏出大 量的黑色粉末。受侵染的植株通常变得矮小。 收集上述可疑植物材料等一并带回实验室检验。 9实验室检测 9.1鳞茎和寄主残体上病菌的鉴定 选取具有黑粉症状的可疑病斑，用针刺破囊肿，用席尔氏浮载剂制成玻片，在显微镜下观察孢子球 的形态特征。 9.2种子上病菌的鉴定 9.2.1制备平均样品 在实验室内将送检样品充分混匀，制成平均样品。 9.2.2称样 从平均样品中称取50g作为实验样品。 9.2.3洗涤离心 实验样品倒人经干热灭菌（165℃，1.5h）后的250mL三角瓶内，加蒸馏水100mL，再加表面活性 剂吐温-20（1滴～2滴），用铝铂纸或parafilm膜将三角瓶封口。将三角瓶放在复式振荡器上振荡 5min，立即取下三角瓶，将悬浮液注入干热灭菌的10mL～20mL刻度离心管内离心（1000r/min） 3min。取出离心管，倾去上清液，再加剩余悬浮液，重复离心，直至所有悬浮液离心完毕，留沉淀物。 9.2.4制片与镜检 离心管中，加人适量席尔氏浮载剂使之悬浮。用可调微量加样器吸取5μL～20uL冬孢子悬浮液 至载玻片上，加盖玻片。制片用冬孢子悬浮液的体积以加盖玻片后悬浮液不外溢为宜。每份试验样品 的冬抱子悬浮液至少镜检5张玻片，每片按视野依次全部检查。观察冬抱子特点，注意观察冬抱子壁的 厚薄，颜色等特征。 9.2.5孢子球的萌发试验 在离心管中加人适量1%的次氯酸钠溶液，将9.2.3所获得的沉淀物涂于载玻片上，在体视显微镜 下挑取一定数量的冬孢子球放入，用涡旋振荡器混合，消毒5min后，以3000r/min离心1min，立即用 微量加样器吸去上清液，加无菌水离心清洗2次，将冬孢子球沉淀物转至洋葱琼脂培养基（参见附录B） 上培养，条件为13℃～22℃、12h间隙光照、75%的空气湿度，重复3个培养血。 ZAG 10鉴定特征 10.1寄主植物症状 洋葱、大蒜等鳞茎表面有铅色泡状囊肿，囊肿刺破后有典型的黑粉症状，鳞茎个头小、干腐，发病较 末。重病植株通常变得矮小，易死亡。 3