ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T33118—2016 李叶蜂检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofHoplocampaflava(L.) 2016-10-13发布 2017-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中国检验认证集团。 本标准主要起草人:魏晓棠、张京宣、陈宏、王惠、王雪嵋、鲁闽、王简、王建力。 ⅠGB/T33118—2016 李叶蜂检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了李叶蜂Hoplocampaflava(L.)的检疫鉴定方法。 本标准适用于李叶蜂的检疫和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T2959 昆虫常规检疫规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 单眼三角区 ocellartriangle 昆虫成虫中三个单眼所在位置,形成三角形的小区。 3.2 唇基 clypeus 昆虫头部位于额唇基沟和上唇之间的区域。 3.3 翅痣 pterostigma 翅前缘上的加厚深色部分,一般位于接近径脉的中部或者末端。 3.4 翅脉 veins 昆虫翅上的管状加厚的构造,用以加强翅面。 注:主要包括前缘脉(costa“C”)、亚前缘脉(subcosta“Sc”)、径脉(radius“R”)、径分脉(radialsector“Rs”)、中脉 (media“M”)、肘脉(cubitus“Cu”)、横脉(crossvein)等脉序。 3.5 闭室 closedcell 完全被翅脉所围绕的翅室。 注:主要有上闭室(Rs室)、下闭室(M室)。 3.6 孤雌生殖 parthenogenesis 卵未经受精而直接发育成新个体的生殖方式。 3.7 阳茎瓣 penisvalve 第九腹节腹板后节间膜的外长物,生殖孔开口在它的末端。一般位于阳茎两侧,一对。 1GB/T33118—2016 3.8 产卵器 ovipositor 雌虫用于产卵的器官,是位于腹部末端的刀片状构造,由4个产卵瓣组合而成。 注:其中腹侧的1对产卵瓣称为锯腹片(Lancet),其腹缘具锯齿状构造。 4 李叶蜂基本信息 学名:Hoplocampaflava(L.) 别名:黄实蜂 异名:TenthredoflavaKulg 英文名:plumsawfly 分类地位:膜翅目Hymenoptera,叶蜂科Tenthredinidae,突瓣叶蜂亚科Nematinae,实蜂属Hoplo- campa。 李叶蜂以卵、幼虫随寄主传带为主要的传播途径,其地理分布、寄主和生物学特征等参见附录A。 实蜂属在全世界目前已知有44个种。Benson(1968)将本属分为3个种组,即Hoplocampatestu- dinea种组、H.oregonensis种组和H.flava种组。H.flava种组包括10个已知种,具有重要经济意义 的主要有李叶蜂H.flava、樱桃叶蜂H.cookei和李小叶蜂H.minuta,三者的主要区分特征参见附 录B。 5 方法原理 根据李叶蜂的为害状、形态特征进行种类鉴定。在检疫现场时,仔细观察寄主果实,若发现疑似李 叶蜂幼虫,需连同被危害寄主一起送实验室饲养获得成虫,利用体视显微镜进行观察鉴定。如果利用外 部形态特征判定其种类仍有疑问时,需进一步解剖雌雄成虫外生殖器并制成玻片标本,在生物显微镜下 观察鉴定。 6 器材和试剂 6.1 器材 可封口塑料袋、标签、吸水纸、镊子、手持放大镜、生物培养箱、小毛笔、指形管、纱布、冰箱、三角纸剪 刀、昆虫针、滴管、培养皿、载玻片、盖玻片、体视显微镜。 6.2 试剂 霍氏封固剂(用阿拉伯树胶30g∶蒸馏水50mL∶水合氯醛200g∶甘油20mL配方配制而成)、 树脂胶、无水乙醇、5%氢氧化钠或氢氧化钾、蒸馏水。 7 检测与饲养 7.1 检测 按照SN/T2959对寄主植物进行检查。若发现可疑幼虫,需连同被害果实一起装入可封口塑料 袋,并加注标签,注明时间、地点、寄主、采集人等。 2GB/T33118—2016 7.2 饲养 将带有幼虫的果实放入光照培养箱中的养虫笼内,在22℃~28℃、相对湿度65%~75%、光照周 期(LD)14h∶10h的条件下饲养至成虫羽化。饲养时,可在养虫笼内放一些瓦楞纸板或蜂窝纸板,供 幼虫化蛹用。每天观察,需要时再放几个同种类果实,以备幼虫转果。 8 标本的制作 8.1 成虫标本 8.1.1 针插标本 将羽化后成虫冷冻杀死(可置于冰箱-20℃下1h左右),软化后在展翅板上展翅,制成针插标本。 干成虫标本需回软化后制作。 8.1.2 浸渍标本 用70%乙醇浸泡保存成虫或幼虫标本。如果要备分子试验用,则可用无水乙醇浸泡,并冷冻保存。 8.2 雄外生殖器玻片标本 用昆虫针取下雄虫腹部投入10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液中煮沸5min~10min(体视显微镜下 观察,虫体几近透明,仅留下外骨骼部分为佳);用滴管吸移至有薄层蒸馏水的培养皿中浸洗;在体视显 微镜下(载物台为白色背景)用细针解剖,除去背腹板等物,仅剩第九背板及其附属构造(雄外生殖器); 用针尖粘取第九背板及其附属构造至载玻片上霍氏封固剂中,体视显微镜下整姿,尽量使雄外生殖器构 造在视野中为正面图像;封片;自然干燥或在40℃~45℃烘箱中干燥。 9 实验室鉴定 9.1 叶蜂科成虫鉴定特征 触角7节~10节,大多数9节,通常为鞭状、丝状或者棍棒状,第1节短于第3节;触角窝接近额唇 基沟。前胸背板后缘深凹,前胸腹板游离,中胸小盾片具明显附片,后胸侧板不与腹部第1背板愈合。 前足胫节端距1对,内距常分叉,各足胫节无亚端距。前翅前缘室狭窄,2R脉常存在,至少具1个完整 的端臀室。后翅通常具5个~7个封闭翅室。腹部背板无侧缘脊,第1背板常具中缝。产卵器短小,常 稍伸出腹部末端。 9.2 实蜂属鉴定特征 成虫小型,唇基前缘具深浅不等的缺口,非平截。额区圆钝,不向前突出。复眼较小,内缘间距宽于 复眼长径。触角9节,总长短于腹部,第2节长明显大于宽,各节长宽比不大于4。上颚端部具2齿,颚 眼距不窄于单眼直径。后足跗节稍短于后3节长度之和;爪有明显的小内齿。前翅(参见图1)具有2R 脉,1M-Cu和2M-Cu脉分别交于1Rs和2Rs室内,臀室具收缩中柄;后翅具上闭室(Rs室)和下闭室 (M室),臀室封闭,臀室柄长。产卵器骨化程度弱,节缝刺突种类间有变化,常有近腹缘距。 成虫翅透明或具弱烟斑,翅脉颜色变化大,有黄白色、栗色和黑色等。成虫体色在种类间常有明显 且较稳定的差别,可用于种类鉴定。 幼虫大部分为白色,也有黄绿色,头部及尾部颜色深。体长9mm~15mm,胸足3对,腹足6对~ 8对。 3GB/T33118—2016 注:引自Norton。 图1 实蜂属[Hoplocampa(Norton)]雌虫前翅翅脉图 9.3 李叶蜂的鉴定特征 9.3.1 成虫 将成虫标本置于体视显微镜下,雄外生殖器玻片标本置于生物显微镜下,观察是否符合以下鉴定特 征(参见附录B和附录C): ———体长3.5mm~5.5mm,体表黄色; ———触角9节; ———复眼细长。唇基宽浅内凹,其深度不及唇基长的一半,顶缘深凹。唇基前缘缺口近似三角形, 深度约等于唇基长的一半; ———颚眼距稍短于前单眼直径; ———头部背侧、胸部背板大部、中胸侧板上半部具较细密小刻点; ———中胸侧板密被毛,毛被均匀,侧板下部无光裸横带; ———雌虫头胸部暗黄褐色,中胸背板无黑斑,后胸背板凹处黑褐色,触角、足和腹部浅黄褐色,有 光泽; ———雄虫单眼区、前胸背板横沟、中胸背板前叶大部、后胸背板大部、胸部侧板沟缝黑褐色。头部、 触角和中胸背板主要为棕色,但是有时头顶和中胸背板有黑斑; ———两性翅透明,翅脉为黄色,前翅基部的翅痣为黑色。翅痣下无明显暗褐色横带,带内黄色,带外 透明;前缘脉,亚前缘脉和痣基为黄色。前翅基部2/3微呈烟黄色,翅脉和翅痣黄褐色; ———腹部橘黄色; ———后足跗节稍短于胫节,爪具微小内齿; ———雌虫产卵器显著短于后足胫节,稍短于后足跗节; ———雄虫下生殖板长大于宽,端部宽圆,弧形突出;阳茎瓣具强烈弯曲的细长端突。 9.3.2 卵 白色,肾形,长,半透明。 9.3.3 幼虫 体长8mm~11mm,圆柱状,略弯,白色至黄绿色。头部橙色或者褐色。幼虫蜕皮4次后,末龄幼 虫体长达6mm~8mm。腹足7对,浅黄色。 4GB/T33118—2016 10 结果判定 以成虫的形态特征为判定依据,以卵、幼虫的形态特征为参考。同时符合9.1、9.2、9.3.1特征的可 判定为李叶蜂。 11 标本保存 经过鉴定的李叶蜂标本应永久保存,并加注明时间、地点、寄主、采集人等信息的标签。 5GB/T33118—2016 附 录 A (资料性附录) 李叶蜂的其他信息 A.1 地理分布 主要分布在西欧、小亚细亚和巴勒斯坦,前苏联的欧洲部分以及波罗的海和高加索地区。有奥地利、 比利时、英国、保加利亚、法国、德国、希腊、匈牙利、爱尔兰、意大利、卢森堡、荷兰、罗马尼亚、西班牙、瑞典、 瑞士、斯洛文尼亚、克罗地亚、塞尔维亚、波斯尼亚、马其顿、黑山、以色列、黎巴嫩、土耳其、摩尔多瓦、克里 米亚、白俄罗斯