ICS11.080 C50 中华人民共和国国家标准 GB/T33419—2016 环氧乙烷灭菌生物指示物检验方法 Testmethodofbiologicalindicatorforethyleneoxidesterilizationprocesses 2016-12-30发布 2017-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅰ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 技术要求 2 ………………………………………………………………………………………………… 5 检验方法 3 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性附录) 抗力测定仪要求及抗力试验 4 …………………………………………………… 附录B(规范性附录) 活菌培养计数方法 5 ……………………………………………………………… 附录C(规范性附录) 存活曲线方法测定D值 6 ………………………………………………………… 附录D(规范性附录) 部分阴性分析法测定D值 7 ……………………………………………………… 附录E(规范性附录) 验证法测定D值 10 …………………………………………………………………GB/T33419—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国卫生和计划生育委员会提出并归口。 本标准起草单位:江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、 国家卫生计生委卫生和计划生育监督中心、徐州市疾病预防控制中心。 标准起草人:徐燕、孙俊、吴晓松、陈越英、张流波、段亚波、史绍毅、王洪敏、黄靖雄、谈智、张剑、 王玲、孙巍、张伟、褚宏亮、常桂秋。 ⅠGB/T33419—2016 环氧乙烷灭菌生物指示物检验方法 1 范围 本标准规定了环氧乙烷灭菌生物指示物的术语和定义、技术要求和检验方法。 本标准适用于对环氧乙烷灭菌生物指示物的检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB18281.1 医疗保健产品灭菌 生物指示物 第1部分:通则 GB18281.2 医疗保健产品灭菌 生物指示物 第2部分:环氧乙烷灭菌用生物指示物 GB/T24628 医疗保健产品灭菌 生物与化学指示物 测试设备 消毒技术规范(2002年版) 卫生部 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 生物指示物 biologicalindicator;BI 对指定条件下的特定灭菌程序具有一定抗力,并装在内层包装中可供使用的染菌载体。包含菌片 和自含式生物指示物。 3.2 载体 carrier 试验微生物的支持物。 3.3 指示微生物 testorganism 用于制备染菌载体的微生物。 3.4 活菌计数 viabletestorganismcount 在规定的培养条件下,测定细菌悬液、染菌载体等样本中含有的活菌数量。通过计算长成的单个菌 落数,而得到单位体积菌悬液中或染菌载体上的存活试验菌菌数。 3.5 D值 Dvalue 在设定的条件下,杀灭微生物数量达90%所需的时间。 注:单位为分(min)。 3.6 存活曲线 survivorcurve 在设定的条件下,微生物的存活情况与对灭菌介质暴露变化的关系曲线。 1GB/T33419—2016 3.7 菌落形成单位 colony-formingunit;CFU 在活菌培养计数时,由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落,以 其表达活菌的数量。 3.8 存活-杀灭区间 survival-killwindow 在规定的条件下灭菌处理时,生物指示物从全部长菌(存活暴露)过渡到全部不长菌(杀灭暴露)的 暴露程序。 3.9 自含式生物指示物 self-containedbiologicalindicator 内层包装中含有细菌复苏生长所需培养基的生物指示物。 3.10 存活时间 survivaltime;ST 用于生物指示物抗力鉴定时,受试指示物样本经杀菌因子作用后全部样本有菌生长的最长作用 时间。 3.11 杀灭时间 killingtime;KT 用于生物指示物抗力鉴定时,受试指示物样本经杀菌因子作用后全部样本无菌生长的最短作用 时间。 4 技术要求 4.1 指示微生物 4.1.1 菌种 环氧乙烷灭菌指示微生物应采用枯草杆菌黑色变种(BacillusatrophaeusATCC9372, NCTC10073,NCIMB8058,DSM2277,NRRLB-4418,CIP77.18)芽胞。 4.1.2 菌量 回收菌量大于等于1.0×106CFU/片,回收菌量同时应在制造商标明菌量的-50%~+300%范 围内。 4.1.3 抗力 当暴露于环氧乙烷浓度600mg/L±30mg/L,温度54℃±1℃,相对湿度60%±10%时,D值大 于等于2.5min,测试的D值应在制造商规定的D值±20%范围内。 4.2 载体 符合GB18281.1和GB18281.2的要求;同时,暴露于温度大于等于55℃,环氧乙烷浓度大于等于 800mg/L,相对湿度大于等于70%、暴露时间大于等于6h等条件下灭菌过程中不会变形、熔化、腐蚀 和其他损坏。 4.3 培养基 4.3.1 培养基和培养条件应能稳定地生产出符合4.1和GB18281.1和GB18281.2性能要求的试验菌 2GB/T33419—2016 悬液。培养基应不影响试验菌的稳定性,同时要与染菌载体和生物指示物制造工艺和材料相兼容。 4.3.2 恢复培养基: a) 使10CFU~100CFU的微生物恢复生长; b) 使损伤的微生物生长; c) 经过环氧乙烷灭菌处理后应确保可以抵消任何可能影响指示微生物活性的化合物,并在有效 期内性能和颜色不发生改变。 4.3.3 生物指示物的设计,应有利于初始微生物数量在储存、运输和装卸过程中的基本稳定并防止外 界微生物对菌片的污染。 4.4 稳定性 生物指示物存放至标签和说明书规定的条件及有效期限后所有技术参数应符合4.1、4.2、4.3。 4.5 生物指示物抗力测定仪要求 生物指示物抗力测定仪应符合GB/T24628的要求,其余要求见附录A。 5 检验方法 5.1 活菌计数 5.1.1 通过菌落形成单位检测方法统计菌片或自含式生物指示物上的试验活菌。这种方法常用于预 期回收菌量在50CFU以上的情况。 5.1.2 本方法适用于初始活菌数(未处理的样品)的检测以及利用存活曲线(处理过的样品)检测D值。 5.1.3 测定回收菌量时,最小检测数量应每批量/批次至少使用4个测试样品,检测方法见附录B。 5.1.4 相关使用材料及配置方法。见《消毒技术规范》2002年版。 5.2 抗力试验 5.2.1 测试抗力时应使用生物指示物抗力测试仪,要求见附录A。 5.2.2 D值测定应至少使用以下两种方法: a) 存活曲线法测定D值(见附录C); b) 部分阴性分析法测定D值(见附录D); c) 验证法测试D值将a)或b)测试出的D值和5.1的菌量进行计算,计算出ST值和KT值,进 行试验验证(见附录E)。 5.3 恢复培养基对少量菌恢复能力的测试 每个样本的恢复培养基中,接种10CFU~100CFU的枯草杆菌黑色变种芽胞,同时设置阴性对照 和阳性对照培养至规定时间后观察变色情况,如果恢复培养基有菌生长,并且阴性对照无菌生长和阳性 对照有菌生长,判断恢复培养基合格。 5.4 材料对灭菌过程兼容性测试 按GB18281.1进行。 5.5 稳定性试验 取包装完好的同批次生物指示物放置于制造商建议的保存条件下,存放至标签和说明书规定的有 效期限,取出再次进行评价,生物指示物应满足4.1、4.2、4.3。 3GB/T33419—2016 附 录 A (规范性附录) 抗力测定仪要求及抗力试验 A.1 抗力测定仪要求 A.1.1 参数要求 时间常数精确度±1s,分辨率1s;温度范围25℃~80℃,精确度±0.5℃,分辨率0.1℃,响应时间 小于等于500ms;真空度范围0kPa~100kPa,精确度±1.0kPa,分辨率0.1kPa,响应时间小于等于 30ms;压力范围100kPa~200kPa,精确度±3.5kPa,分辨率0.1kPa,响应时间小于等于30ms;相对 湿度范围20%~90%,精确度±5%,分辨率1%,响应时间15000ms;环氧乙烷浓度范围25mg/L~ 1200mg/L,精确度为±设定浓度的5%。 A.1.2 记录范围 抗力测定仪应能自动记录上述参数,不少于10s一个数据点。相对湿度和环氧乙烷浓度可由传感 器直接测量,或者由压力参数推算。 A.1.3 其他要求 抗力测定仪应配备有抽真空装置,让反应室的真空度低于10kPa,以便在通入环氧乙烷之前充分 排除室内空气,并与暴露阶段结束时把环氧乙烷全部排出,其中通入环氧乙烷气体达到规定的气体浓 度,所需时间小于等于60s,排出环氧乙烷气体达到真空(10kPa),所需时间亦小于