中华人民共和国国家标准 GB4789.40—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB4789.40—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB4789.40—2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》、 SN/T1632.1—2013《出口奶粉中阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)检验方法 第1部分:分离与计数》。 本标准与GB4789.40—2010相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆 菌)检验”; ———修改了可疑菌落的挑取数量。GB4789.40—2016 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验 1 范围 本标准规定了食品中克罗诺杆菌属(Cronobacter)的检验方法。 本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中克罗诺杆菌属的检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 2.1 恒温培养箱:25℃±1℃,36℃±1℃,44℃±0.5℃。 2.2 冰箱:2℃~5℃。 2.3 恒温水浴箱:44℃±0.5℃。 2.4 天平:感量0.1g。 2.5 均质器。 2.6 振荡器。 2.7 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。 2.8 无菌锥形瓶:容量100mL、200mL、2000mL。 2.9 无菌培养皿:直径90mm。 2.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.11 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水(bufferpeptonewater,BPW):见A.1。 3.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(modifiedlaurylsulfatetryptosebroth-vancomycin medium,mLST-Vm):见A.2。 3.3 阪崎肠杆菌显色培养基。 3.4 胰蛋白胨大豆琼脂(trypticasesoyagar,TSA):见A.3。 3.5 生化鉴定试剂盒。 3.6 氧化酶试剂:见A.4。 3.7 L-赖氨酸脱羧酶培养基:见A.5。 3.8 L-鸟氨酸脱羧酶培养基:见A.6。 3.9 L-精氨酸双水解酶培养基:见A.7。 3.10 糖类发酵培养基:见A.8。 3.11 西蒙氏柠檬酸盐培养基:见A.9。GB4789.40—2016 2 第一法 克罗诺杆菌属定性检验 4 检验程序 克罗诺杆菌属检验程序见图1。 图1 克罗诺杆菌属检验程序 5 操作步骤 5.1 前增菌和增菌 取检样100g(mL)置灭菌锥形瓶中,加入900mL已预热至44℃的缓冲蛋白胨水,用手缓缓地摇 动至充分溶解,36℃±1℃培养18h±2h。移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤,44℃±0.5℃ 培养24h±2h。 5.2 分离 5.2.1 轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物,各取增菌培养物1环,分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色 培养基平板,显色培养基须符合GB4789.28的要求,36℃±1℃培养24h±2h,或按培养基要求条件