ICS71.100.70 Y42 中华人民共和国国家标准 GB/T30089—2013 化 妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲 的测定 液相色谱/串联质谱法 Determinationofchlorporpamide,carbutamideandtolbutamidein cosmeticsbyLC-MS/MSmethod 2013-12-17发布 2014-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草。 本标准由全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会(SAC/TC374)归口。 本标准起草单位:国家化妆品质量监督检验中心(北京)、北京市海淀区产品质量监督检验所、中检 联盟(北京)质检技术研究院。 本标准主要起草人:郭启雷、杨红梅、史海良、赵丽、刘艳琴、田艳玲。 ⅠGB/T30089—2013 化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲 的测定 液相色谱/串联质谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的液相色谱/串联质谱测定方法。 本标准适用于水剂类、膏霜类、凝胶类、粉类及唇膏类化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的 测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 水剂类、膏霜类、凝胶类、粉类化妆品用甲醇提取;唇膏类化妆品经四氢呋喃分散,甲醇提取,固相萃 取小柱净化,采用高效液相色谱/串联质谱仪测定,外标法定量。 4 试剂与材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 乙腈:色谱纯。 4.2 甲醇:色谱纯。 4.3 甲酸:色谱纯。 4.4 四氢呋喃。 4.5 氨水。 4.6 氯化钠。 4.7 0.1%甲酸水溶液:准确移取1mL甲酸(4.3)至1000mL容量瓶中,用水定容。 4.8 2%甲酸甲醇溶液:准确移取10mL甲酸(4.3)至500mL容量瓶中,用甲醇(4.2)定容。 4.9 5%氨水甲醇溶液:准确移取25mL氨水(4.5)至500mL容量瓶中,用甲醇(4.2)定容。 4.10 标准样品:氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲标准样品,具体信息见表1。 表1 标准样品信息 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 氯磺丙脲 Chlorpropamide 94-20-2 C10H13ClN2O3S 276.74 氨磺丁脲 Carbutamide 339-43-5 C11H17N3O3S 271.34 甲苯磺丁脲 Tolbutamide 64-77-7 C12H18N2O3S 270.35 1GB/T30089—2013 4.11 标准溶液。 4.11.1 标准储备溶液:准确称取0.1g氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲标准样品(4.10)(精确至 0.0001g),分别用甲醇(4.2)配制成浓度为1mg/mL的标准储备液,4℃冰箱保存,有效期6个月。 4.11.2 混合标准储备溶液:分别准确量取1.00mL氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲标准储备溶液 (4.11.1)至100mL容量瓶中,用甲醇(4.2)稀释定容,配制成0.01mg/mL的混合标准储备溶液,4℃冰 箱保存,有效期1个月。 4.11.3 混合标准工作溶液:准确量取1.00mL混合标准储备溶液(4.11.2)至100mL容量瓶中,用甲醇 (4.2)稀释定容,配制成100ng/mL的混合标准工作溶液,4℃冰箱保存,临用前配制。 4.12 PAX固相萃取小柱:CleanertPAX阴离子交换柱或性能相当者,60mg/3mL,预先用3mL甲醇 (4.2)、3mL5%氨水甲醇溶液(4.9)活化。 4.13 微孔滤膜:0.22μm,有机相。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱/串联质谱仪(LC-MS/MS):配有电喷雾离子源。 5.2 分析天平:感量分别为0.0001g和0.00001g。 5.3 高速离心机:离心力不低于6000g。 5.4 超声波清洗器。 5.5 涡旋混合器。 5.6 氮吹仪。 6 分析步骤 6.1 样品制备 6.1.1 水剂类样品 称取样品1.0g(精确至0.001g),加入甲醇(4.2)定容至5.0mL,涡旋30s,必要时6000g离心 10min,经0.22μm微孔滤膜(4.13)过滤,滤液用液相色谱/串联质谱仪测定。 6.1.2 膏霜类、凝胶类、粉类样品 称取样品0.5g(精确至0.001g),加入甲醇(4.2)定容至5.0mL,加入氯化钠(4.6)2g,剧烈振荡使 样品分散,涡旋1min,超声15min,6000g离心10min,取上清液经0.22μm微孔滤膜(4.13)过滤,滤 液用液相色谱/串联质谱仪测定。 6.1.3 唇膏类样品 称取样品0.4g(精确至0.001g),加入2mL四氢呋喃(4.4),剧烈振荡使样品分散,涡旋1min,超 声10min,加入5%氨水甲醇溶液(4.9)定容至10.0mL,加入氯化钠(4.6)2g,超声10min,6000g离 心10min,取5mL上清液流经已预先活化的PAX固相萃取小柱(4.12),待上清液自然流尽后,用3mL 甲醇(4.2)淋洗,用吸球吹出小柱中残留液体,弃去。再加入3mL2%甲酸甲醇溶液(4.8)洗脱,待甲酸 甲醇溶液自然流尽后,用吸球吹出小柱中残留液体,收集洗脱液,缓慢氮气流下吹干,准确吸取1mL甲 醇(4.2)溶解,经0.22μm微孔滤膜(4.13)过滤,滤液用液相色谱/串联质谱仪测定。 6.2 标准工作曲线的制备 取相应的空白样品,按照步骤6.1进行处理,用得到的空白样品提取液稀释混合标准工作溶液 2GB/T30089—2013 (4.11.3),配制所需浓度系列的标准溶液,按浓度从低到高依次经液相色谱/串联质谱仪测定,以定量离 子的峰面积为纵坐标,以标准溶液浓度为横坐标,得标准工作曲线。 氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见图A.1。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱:C18色谱柱,150mm×2.1mm(i.d.),3.5μm,或性能相当者; b) 流动相:流动相及梯度洗脱程序见表2; c) 流速:0.3mL/min; d) 柱温:40℃; e) 进样量:5μL。 表2 液相色谱梯度洗脱程序 时间 minA相∶乙腈/% B相∶0.1%甲酸水溶液/% 0 20 80 5 40 60 12 40 60 12.1 20 80 6.3.2 质谱参考条件 a) 离子源:电喷雾离子源(ESI); b) 扫描方式:正离子扫描; c) 监测方式:多反应监测(MRM); d) 干燥气:氮气,温度350℃,流速10L/min; e) 雾化器:氮气,压力40psi*; f) 毛细管电压:4000V。 g) 保留时间、定性离子对、定量离子对、碎裂电压及碰撞能量见表3。 表3 氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的质谱参数 化合物保留时间 min定性离子对(m/z)定量离子对(m/z)碎裂电压 V碰撞能量 eV 氨磺丁脲 6.8272.2/92.1 272.2/74.2272.2/74.2 8030 10 氯磺丙脲 10.0277.1/175.0 277.1/111.0277.1/111.0 8015 35 甲苯磺丁脲 11.1271.1/155.0 271.1/91.1271.1/91.1 9015 35 *1psi=0.006895MPa 3GB/T30089—2013 6.3.3 定性确证 每种被测组分选择1个母离子,2个子离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时间与标 准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内;且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准 溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,若偏差不超过表4规定的范围,可判定为样品中含有对应 的待测物。 表4 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 6.3.4 定量分析 本方法采用外标标准工作曲线法定量测定。标准工作曲线线性回归方程由6.2得到,以样品的峰 面积与标准工作曲线比较定量。待测物的响应值均应在线性范围内。 6.4 空白实验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行。 6.5 平行试验 按以上步骤,对同一样品进行平行试验测定。 7 结果计算 样品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的含量由色谱数据处理软件获得或按式(1)计算: X=c×V×k×1000 m×1000…………………………(1) 式中: X———样品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的含量,单位为微克每千克(μg/kg); c———样品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲峰面积对应的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL); V———样品定容体积,单位为毫升(mL); m———样品的质量,单位为克(g); k———乘积因子,对于水剂类化妆品、膏霜、凝胶、粉类化妆品,k=1;对于唇膏类化妆品,k=2。 注:计算结果需扣除空白值。测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留至小数点后一位。 8 检出限与定量限 水剂类化妆品、唇膏类化妆品中氯磺丙脲、氨磺丁脲、甲苯磺丁脲的检出限为3.0μg/kg,定量限为 10.0μg/kg;膏霜类、