ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T17812—2025 代替GB/T17812—2008 饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法 DeterminationofvitaminEinfeeds—Highperformanceliquidchromatography 2025-01-24发布 2025-08-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T17812—2008《饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法》,与GB/T17812— 2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 皂化提取法和直接提取法适用范围分别增加了精料补充料和复合预混合饲料(见第1章); b) 提取剂更改为石油醚(沸程30℃~60℃)(见第4章,2008年版第3章); c) 增加了维生素E(dl-α-生育酚)标准系列溶液(见4.2.16); d) 更改了试样制备要求(见4.4,2008年版的3.5); e) 增加了固相萃取法(见4.5.1.2.2); f) 删除了正相色谱条件(见2008年版的第3章); g) 更改了检测波长(见4.5.2.1,2008年版的3.6.2.1.2); h) 增加了液相色谱参考条件Ⅱ(见4.5.2.2); i) 增加了定性方法,定量方法增加了多点校正(见4.5.2.4和4.5.2.5); j) 更改了试验数据处理(见4.6和5.6,2008年版的3.6.2.3和4.6.2.3); k) 增加了维生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)标准系列溶液(见5.2.5); l) 更改了提取温度(见5.5.1,2008年版的4.6.1); m) 增加了定性方法,定量方法增加了多点校正(见5.5.2.3和5.5.2.4)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:山东省畜产品质量安全中心(山东省畜禽屠宰技术中心)、四川威尔检测技术股份 有限公司、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、帝斯曼维生素(上海)有限公司。 本文件主要起草人:张玮、张凤枰、张芸、孙延军、谢丽、闫传琦、布岩林、王英英、朱良智、樊霞、 李俊玲、李会荣、赵学峰、赵小阳、虞哲高、吴立国、张超、吴金玉。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———1999年首次发布为GB/T17812-1999,2008年第一次修订; ———本次为第二次修订。 ⅠGB/T17812—2025 饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件描述了饲料中维生素E的高效液相色谱测定方法。 本文件中皂化提取法适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料 中维生素E(dl-α-生育酚)的测定;直接提取法适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素E (dl-α-生育酚乙酸酯)的测定。 本文件皂化提取法定量限为1.1IU/kg;直接提取法定量限为20IU/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 第一法 皂化提取法 4.1 原理 试样中的维生素E用碱溶液皂化,经液液萃取或固相萃取净化,高效液相色谱仪测定,外标法 定量。 4.2 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 4.2.1 水:GB/T6682,一级。 4.2.2 无水乙醇:色谱纯。 4.2.3 无水乙醇。 4.2.4 石油醚:沸程30℃~60℃。 4.2.5 甲醇:色谱纯。 4.2.6 乙腈:色谱纯。 4.2.7 甲酸:色谱纯。 4.2.8 L-抗坏血酸。 4.2.9 二丁基羟基甲苯(BHT)。 4.2.10 无水硫酸钠。 1GB/T17812—2025 4.2.11 氢氧化钾溶液(500g/L):称取500g氢氧化钾,加水溶解,冷却后用水定容至1000mL,混 匀,于聚四氟乙烯瓶中保存。 4.2.12 乙醇溶液(70%,体积分数):量取无水乙醇(4.2.3)70mL,用水稀释,定容至100mL,混匀。 4.2.13 甲醇溶液(10%,体积分数):移取甲醇(4.2.5)10mL,用水稀释,定容至100mL,混匀。 4.2.14 甲酸溶液(0.1%,体积分数):移取甲酸(4.2.7)1mL,用水稀释,定容至1000mL,混匀。 4.2.15 维生素E(dl-α-生育酚)标准储备溶液(1mg/mL):称取dl-α-生育酚标准品(CAS号:10191- 41-0,纯度不低于99.0%)100mg(精确至0.0001g)于100mL棕色容量瓶中,用无水乙醇(4.2.2)溶解 并定容,混匀。-18℃以下避光保存,有效期6个月。 4.2.16 维生素E标准系列溶液:准确移取适量的维生素E标准储备溶液(4.2.15),分别于100mL棕 色容量瓶中,用甲醇(4.2.5)稀释并定容,混匀,配制成质量浓度分别为0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、 10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL标准系列溶液。临用现配。 4.2.17 酚酞指示剂(10g/L):称取1g酚酞,用无水乙醇(4.2.3)溶解,并定容至100mL,混匀。 4.2.18 固相萃取柱:填料为聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物,200mg/6mL,或性能相当者。 4.2.19 微孔滤膜:孔径0.22μm,有机系。 4.2.20 氮气:纯度不低于99.9%。 4.3 仪器设备 4.3.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管矩阵检测器。 4.3.2 分析天平:精度为0.0001g和0.001g。 4.3.3 回流装置:圆底烧瓶和冷凝管。 4.3.4 恒温水浴锅:控温精度±2℃。 4.3.5 旋转蒸发仪。 4.3.6 离心机:转速不低于10000r/min。 4.3.7 固相萃取装置。 4.3.8 氮吹仪:带加热装置,温度精度±2℃。 4.3.9 涡旋混合器。 4.4 样品 配合饲料、浓缩饲料、精料补充料样品,按GB/T20195制备试样,至少200g,粉碎至全部通过 1mm孔径的试验筛,混合均匀,装入密闭容器中;复合预混合饲料和维生素预混合饲料样品直接装入 密闭容器中。2℃~8℃避光保存,尽快测定。 4.5 试验步骤 4.5.1 试样溶液的制备 注意:分液漏斗活塞玻璃表面不涂油,处理过程在避光下操作,提取过程在通风柜中操作。 4.5.1.1 皂化 平行做两份试验。配合饲料、浓缩饲料、精料补充料试样称取5g~10g(精确至0.001g),复合预 混合饲料试样称取2g~4g(精确至0.001g),维生素预混合饲料试样称取1g(精确至0.0001g),置入 250mL圆底烧瓶中,加1gL-抗坏血酸(4.2.8)、0.2gBHT(4.2.9),加入50mL无水乙醇(4.2.3),摇匀 后加入20mL氢氧化钾溶液(4.2.11),混合均匀,置于沸水浴上回流30min,不时振荡,防止试样黏附在 瓶壁上。皂化结束,分别用5mL无水乙醇(4.2.3)、5mL水自冷凝管顶端冲洗其内部,取出烧瓶冷却至 2GB/T17812—2025 约40℃,尽快提取净化。 4.5.1.2 提取净化 4.5.1.2.1 液液萃取法 将皂化液(4.5.1.1)全部转移至盛有100mL石油醚(4.2.4)的500mL分液漏斗中,用30mL~ 50mL水分2次~3次冲洗圆底烧瓶并转入分液漏斗,再用5mL~10mL乙醇(4.2.3)冲洗转移,加盖、 混匀后放气,激烈振荡2min,静置、分层。转移水相于另一个分液漏斗中,分别用100mL、60mL石油 醚(4.2.4)各提取1次,弃去水相,合并3次石油醚相。用水每次100mL洗涤石油醚提取液至中性[可 用酚酞指示剂(4.2.17)检测下层溶液,直至无色]。初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化。石油醚提取液通 过无水硫酸钠(4.2.10)脱水,转移至250mL棕色容量瓶中,用石油醚定容,混匀。 从石油醚提取液中准确分取一定体积(依据样品标示量、称样量和提取液量确定分取量)置于旋转 蒸发器烧瓶中,在约50℃的条件下蒸发至干或用氮气吹干。残渣用甲醇(4.2.5)溶解,并定容至 10mL,使获得的溶液中维生素E(dl-α-生育酚)含量在标准系列溶液线性范围内,过微孔滤膜 (4.2.19),待测。 4.5.1.2.2 固相萃取法 将皂化液(4.5.1.1)全部转移至100mL棕色容量瓶中,用5mL乙醇溶液(4.2.12)洗涤瓶内的残渣 并将溶液转入容量瓶内,重复洗涤2次,用乙醇溶液(4.2.12)定容,混匀。取一定体积皂化液于离心管 中,10000r/min离心5min,上清液待用。用3mL甲醇、5mL水活化固相萃取柱。 对于配合饲料、浓缩饲料和精料补充料,准确移取5mL上清液于15mL具塞离心管中,加2mL 水,涡旋混匀,全部加载到已活化的固相萃取柱中,控制流速小于2mL/min,用甲醇溶液(4.2.13)洗涤 2次离心管一并过柱,每次2mL,再用4mL甲醇溶液(4.2.13)淋洗固相萃取柱,抽干,用乙腈(4.2.6)洗 脱3次,每次1mL,合并洗脱液,于