书 书 书犐犆犛 ６７ ． １８０ ． １０ 犅 ４７ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２１１６９ — ２００７ 蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量测定 液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犿犻狋狉犪狕犪狀犱犿犲狋犪犫狅犾犻狋犲狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犺狅狀犲狔 — 犔犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２００７  １０  ３１ 发布 ２００８  ０４  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 。 本标准主要起草人 ： 赵增运 、 陈惠兰 、 林宏 、 吴斌 、 丁涛 、 徐锦忠 、 沈崇钰 、 朱成晶 、 蒋原 、 陶宏锦 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２１１６９ — ２００７ 蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量测定 液相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量液相色谱测定方法提要 、 测定步骤 、 结果计算 。 本标准适用于蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — １９９２ ， ｎｅｑＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ） ３ 　 方法提要 蜂蜜样品中双甲脒及其代谢物用正己烷 、 异丙醇混合提取液提取 ， 提取液浓缩后 ， 依次用乙腈 、 水定 容 ， 用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定 ， 外标法定量 。 ４ 　 试剂和材料 ４ ． １ 　 水 ： 应符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． ２ 　 乙腈 ： ＨＰＬＣ 级 。 ４ ． ３ 　 正己烷 ： 优级纯 。 ４ ． ４ 　 异丙醇 ： 分析纯 。 ４ ． ５ 　 混合提取液 ： 将 ６０ｍＬ 的正己烷与 ３０ｍＬ 的异丙醇混合 。 ４ ． ６ 　 氢氧化钠 ： 分析纯 。 ４ ． ７ 　 氢氧化钠溶液 ： ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 。 称取 ４．０ｇ 氢氧化钠 ， 溶于 １０００ｍＬ 水中 。 ４ ． ８ 　 乙酸铵溶液 ： ０．０２ｍｏｌ ／ Ｌ 。 称取 １．５４ｇ 乙酸铵 ， 溶于 １０００ｍＬ 水中 。 ４ ． ９ 　 双甲脒标准品 （ 纯度 ＞ ９９％ ）。 ４ ． １０ 　 ２ ， ４ 二甲基苯胺标准品 （ 纯度 ＞ ９９％ ）。 ４ ． １１ 　 双甲脒标准储备溶液 ： ０．１ｍｇ ／ ｍＬ 。 准确称取适量的双甲脒标准物质 （ ４．９ ）， 用乙腈配成 ０．１ｍｇ ／ ｍＬ 的标准储备液 。 储备液保存于 ４℃ 冰箱中 ， 根据需要再用乙腈稀释成适当浓度的标准工作 液 。 保存 ３ 个月 。 ４ ． １２ 　 ２ ， ４ 二甲基苯胺标准储备溶液 ： ０．１ｍｇ ／ ｍＬ 。 准确称取适量的 ２ ， ４ 二甲基苯胺标准物质 （ ４．１０ ）， 用乙腈配成 ０．１ｍｇ ／ ｍＬ 的标准储备液 。 储备液保存于 ４℃ 冰箱中 ， 根据需要再用乙腈稀释成适当浓度 的标准工作液 。 保存 ３ 个月 。 ５ 　 仪器 ５ ． １ 　 高效液相色谱仪 ： 配有紫外检测器 。 ５ ． ２ 　 分析天平 ： 感量 ０．１ｍｇ 。 ５ ． ３ 　 天平 ： 感量 ０．０１ｇ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２１１６９ — ２００７ ５ ． ４ 　 旋转蒸发器或相当者 。 ５ ． ５ 　 旋涡混匀器 。 ５ ． ６ 　 移液管 ： １０ｍＬ ， ５ｍＬ ， １ｍＬ 。 ５ ． ７ 　 有机滤膜 ： ０．４５ μ ｍ 。 ５ ． ８ 　 离心机 ： ３０００ｒ ／ ｍｉｎ ， １００００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ９ 　 具塞离心管 ： ５０ｍＬ ， １．５ｍＬ 。 ６ 　 试样的制备与保存 ６ ． １ 　 试样制备 对无结晶的实验室样品 ， 将其搅拌均匀 。 对有结晶的样品 ， 在密闭情况下 ， 置于不超过 ６０℃ 的水浴 中温热 ， 振荡 ， 待样品全部融化后搅匀 ， 冷却至室温 。 均分成两份 ， 分别装入样品瓶内作为原始样品 。 密 封并标明标记 。 ６ ． ２ 　 试样保存 将试样于常温状态下保存 。 注 ： 在取样和制样的操作过程中 ， 应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 。 ７ 　 测定步骤 ７ ． １ 　 提取 称取 ５ｇ 试样 （ 精确至 ０．０１ｇ ）。 置于 ５０ｍＬ 具塞离心管中 ， 加入 ５．０ｍＬ 氢氧化钠溶液 ， 旋涡混匀 １ｍｉｎ ， 再加入 １５．０ｍＬ 混合提取液 ， 旋涡混匀 １ｍｉｎ ， 混匀后于 ３０００ｒ ／ ｍｉｎ 下离心 ５ｍｉｎ ， 吸取上层液 转移至 ５０ｍＬ 离心管中 ； 再加入 １０．０ｍＬ 正己烷 ， 旋涡混匀 １ｍｉｎ ， 混匀后于 ３０００ｒ ／ ｍｉｎ 下离心 ５ｍｉｎ ， 吸取上清液转移至 ５０ｍＬ 离心管中 ， 于 ３５℃ ～ ４０℃ 的水浴中旋转蒸发浓缩至干 ， 用 ０．５０ｍＬ 乙腈溶解 残渣 ， 转移至 １．５ｍＬ 离心管 ； 再加入 ０．５０ｍＬ 水溶解残渣 ， 合并转移至 １．５ｍＬ 离心管 ， 在 １００００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ５ｍｉｎ ， 溶液过 ０．４５ μ ｍ 的滤膜到进样瓶中 ， 供液相色谱仪测定 。 ７ ． ２ 　 测定 ７ ． ２ ． １ 　 液相色谱条件 ａ ） 　 色谱柱 ： Ｃ １８ ， ５ μ ｍ ， １５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ）， 或相当者 ； ｂ ） 　 流动相 ： 乙腈 （ Ａ ） ＋０．０２ｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸铵水溶液 （ Ｂ ）； ｃ ） 　 梯度洗脱程序 ： ０ｍｉｎ ～ ６．０ｍｉｎ３５％Ａ ， ６ｍｉｎ ～ ８．５ｍｉｎ３５％ ～ ９０％Ａ ， ８．５ｍｉｎ ～ １６ｍｉｎ ９０％Ａ ， １６．０ｍｉｎ ～ １６．１ｍｉｎ９０％ ～ ３５％Ａ ， １６．１ｍｉｎ ～ ２０．０ｍｉｎ３５％Ａ ； ｄ ） 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｅ ） 　 柱温 ： ３０℃ ； ｆ ） 　 进样量 ： ２０ μ Ｌ ； ｇ ） 　 检测波长 ： ２３５ｎｍ （ ０ｍｉｎ ～ １０．０ｍｉｎ ）； ２８９ｎｍ （ １０．０ｍｉｎ ～ ２０．０ｍｉｎ ）； ｈ ） 　 检测器 ： 紫外检测器 。 ７ ． ２ ． ２ 　 液相色谱测定 根据样液中双甲脒残留量情况 ， 选定峰面积相近的标准工作溶液 。 标准工作溶液和样液中双甲脒 及其代谢物响应值均应在仪器检测线性范围内 。 对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定 。 在 上述色谱条件下 ， 双甲脒的保留时间约为 １３．４４ｍｉｎ ， 其代谢物的保留时间约为 ７．２４ｍｉｎ 。 标准品色谱 图参见图 Ａ．１ 。 ７ ． ３ 　 空白试验 除不称取试样外 ， 均按上述步骤进行 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２１１６９ — ２００７ ８ 　 结果计算 ８ ． １ 　 结果用色谱数据处理机或按式 （ １ ） 计算试样中双甲脒残留量 ， 计算结果需扣除空白值 。 犡 １ ＝ 犃 １ · 犮 １ · 犞 １ 犃 Ｓ１ · 犿 １ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犡 １ ——— 试样中双甲脒残留含量 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； 犃 １ ——— 样液中双甲脒的峰面积 ； 犮 １ ——— 标准工作溶液中双甲脒的浓度 ， 单位为微克每毫升 （ μ ｇ ／ ｍＬ ）； 犞 １ ——— 样液最终定容体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犃 Ｓ１ ——— 标准工作溶液中双甲脒的峰面积 ； 犿 １ ——— 最终样液代表的试样量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 ８ ． ２ 　 结果用色谱数据处理机或按式 （ ２ ） 计算试样中代谢物换算成双甲脒残留量 ， 计算结果需扣除空 白值 。 犡 ２ ＝ 犃 ２ · 犮 ２ · 犞 ２ 犃 Ｓ２ · 犿 ２ × １ ． ２１ …………………………（ ２ ） 　　 式中 ： 犡 ２ ——— 试样中代谢物换算成双甲脒残留含量 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； 犃 ２ ——— 样液中双甲脒代谢物 （ ２ ， ４ 二甲基苯胺 ） 的峰面积 ； 犮 ２ ——— 标准工作溶液中双甲脒代谢物 （ ２ ， ４ 二甲基苯胺 ） 的浓度 ， 单位为微克每毫升 （ μ ｇ ／ ｍＬ ）； 犞 ２ ——— 样液最终定容体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犃 Ｓ２ ——— 标准工作溶液中双甲脒代谢物 （ ２ ， ４ 二甲基苯胺 ） 的峰面积 ； 犿 ２ ——— 最终样液代表的试样量 ， 单位为克 （ ｇ ）； １．２１ ——— 由 ２ ， ４ 二甲基苯胺分子质量换算为双甲脒分子质量的转换系数 。 ８ ． ３ 　 双甲脒残留总量按式 （ ３ ） 计算 。 犡 ３ ＝ 犡 １ ＋ 犡 ２ …………………………（ ３ ） 　　 式中 ： 犡 ３ ——— 试样中双甲脒残留总含量 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； 犡 １ ——— 试样中双甲脒残留含量 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； 犡 ２ ——— 试样中代谢物换算成双甲脒残留