书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０２０ 犅 １６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２２１０１ ． １ — ２００８ 棉花抗病虫性评价技术规范 第 １ 部分 ： 棉铃虫 犜犲犮犺狀犻犮犪犾狊狆犲犮犻犳犻犮犪狋犻狅狀犳狅狉犲狏犪犾狌犪狋犻狀犵狉犲狊犻狊狋犪狀犮犲狅犳 犮狅狋狋狅狀狋狅犱犻狊犲犪狊犲犪狀犱犻狀狊犲犮狋狆犲狊狋狊 — 犘犪狉狋 １ ： 犆狅狋狋狅狀犫狅犾犾狑狅狉犿 ２００８  ０６  １８ 发布 ２００８  １２  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ２２１０１ 《 棉花抗病虫性评价技术规范 》 分为以下五部分 ： ——— 第 １ 部分 ： 棉铃虫 ； ——— 第 ２ 部分 ： 棉蚜 ； ——— 第 ３ 部分 ： 红铃虫 ； ——— 第 ４ 部分 ： 枯萎病 ； ——— 第 ５ 部分 ： 黄萎病 。 本部分是 ＧＢ ／ Ｔ２２１０１ 的第 １ 部分 。 本部分的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 为资料性附录 。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口 。 本部分起草单位 ： 中国农业科学院植物保护研究所 、 全国农业技术推广服务中心 。 本部分主要起草人 ： 王武刚 、 张永军 、 吴孔明 、 郭荣 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２２１０１ ． １ — ２００８ 棉花抗病虫性评价技术规范 第 １ 部分 ： 棉铃虫 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ２２１０１ 的本部分规定了转基因棉花 、 杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定方法和抗虫性评 价标准 。 本部分适用于棉花育种 、 棉花生产和植保单位对转基因棉花 、 杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定 和抗虫性评价 。 ２ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于 ＧＢ ／ Ｔ２２１０１ 的本部分 。 ２ ． １ 幼虫死亡率 　 犾犪狉狏犪犾犿狅狉狋犪犾犻狋狔 棉铃虫幼虫取食棉花后死亡幼虫数占供试幼虫总数的百分率 。 ２ ． ２ 蕾铃受害率 　 犱犪犿犪犵犲犱狉犪狋犲狊狅犳狊狇狌犪狉犲犪狀犱犫狅犾犾 棉铃虫幼虫危害棉花蕾铃数占棉花植株蕾铃总数的百分率 。 ２ ． ３ 初孵幼虫 　 狀犲狅狀犪狋犲 刚从卵中孵化出的棉铃虫幼虫 。 ２ ． ４ 双重皿 　 狆犲狋狉犻犱犻狊犺 大小一致的培养皿相对扣在一起 。 ２ ． ５ 标准感虫棉花品种 　 犮狅狋狋狅狀犮狌犾狋犻狏犪犾犳狅狉狊狌狊犮犲狆狋犻犫犻犾犻狋狔狋狅犮狅狋狋狅狀犫狅犾犾狑狅狉犿 棉铃虫幼虫取食供试棉叶状况达到 ４ 级的非转基因相同棉种的棉花品种 。 ３ 　 供试棉铃虫的饲养 ３ ． １ 　 饲养棉铃虫的基本设施和条件 具有调温和光照设备的养虫室 ， 温度保持在 ２５℃ ～ ２８℃ 之间和保证 ≥ １４ｈ 光照时间 。 培养皿 （ 直 径 ９ｃｍ ）、 养虫管 （ 直径 ２．５ｃｍ ， 高 ８ｃｍ ）、 养虫架 、 饲喂幼虫的人工饲料 （ 人工饲料配制参见附录 Ａ 和附 录 Ｂ ）。 饲养成虫用铁纱笼 、 纱布 、 剪子 、 镊子 、 毛笔等养虫用具和存放饲料的冰箱及操作台 。 ３ ． ２ 　 棉铃虫成虫饲养 将羽化后的雌 、 雄成虫混合放入铁纱笼内 ， 饲喂以 ５％ 蔗糖水或蜂蜜水 ， 由其自由交配 ， 在铁纱笼上 覆盖纱布 ， 使雌蛾产卵于纱布上 。 ３ ． ３ 　 卵的处理 将同日产卵的纱布放在同一培养皿内 ， 然后放在养虫室的养虫架上 ， 等待卵的孵化 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２２１０１ ． １ — ２００８ ３ ． ４ 　 幼虫饲养 孵化后幼虫接在人工饲料上 ， 刚孵化幼虫用培养皿集体饲养 ， ２ 龄 ～ ３ 龄后分管单虫饲养 。 ３ ． ５ 　 供鉴定用棉铃虫 室内鉴定用孵化后在人工饲料上饲养 ２ｄ 的 １ 龄幼虫 。 网室鉴定用棉铃虫成虫和卵或初孵 幼虫 。 ３ ． ６ 　 对照材料 ３ ． ６ ． １ 　 转基因棉花鉴定以对应的非转基因棉花受体亲本为对照 。 ３ ． ６ ． ２ 　 转基因杂交棉花鉴定以对应的非转基因亲本为对照 。 ３ ． ６ ． ３ 　 常规杂交棉花鉴定以标准感虫棉花为对照 。 ３ ． ６ ． ４ 　 常规棉花鉴定以标准感虫棉花为对照 。 ４ 　 转基因棉花植株抗棉铃虫性室内鉴定 ４ ． １ 　 供试棉叶 供试转基因棉株的叶片为从植株顶部展开的第 ３ 片棉叶 。 ４ ． ２ 　 供试棉铃虫 １ 龄幼虫 ， 即从卵孵化后在人工饲料上饲养 ２ｄ 的幼虫 。 ４ ． ３ 　 鉴定方法 ４ ． ３ ． １ 　 双重皿集体饲虫 将棉叶放在双重皿内 （ 大叶放 １ 片 ， 小叶放 ２ 片 ）， 每皿接 １ 龄幼虫 ８ 头 ， 重复 ３ 次 ， 皿底放置 １ 张湿 滤纸 ， 用小湿棉球包紧叶柄底部 ， 保持棉叶在供试期内不干 。 接虫后用纸条或封口膜将双重皿封严 ， 防 止幼虫逃逸和保持皿内湿度 。 放入 ２５℃ ～ ２８℃ 的养虫室或培养箱中饲养 。 ４ ． ３ ． ２ 　 分管单头饲养 将碎叶块放在管内 ， 每管接 １ 头 １ 龄幼虫 ， 每处理接 ２４ 管 。 放入 ２５℃ ～ ２８℃ 的养虫室或培养箱 中饲养 。 ４ ． ４ 　 鉴定结果调查 调查 ２ 次 ， 第 １ 次调查在接虫后第 ３ 天 ， 第 ２ 次调查在第 ６ 天 ， 调查记录内容如下 。 ４ ． ４ ． １ 　 幼虫死亡状况 统计幼虫死亡数和活虫数 ， 计算幼虫死亡率 。 需继续观察时将死亡虫挑出累计 。 ４ ． ４ ． ２ 　 幼虫取食状况 以目测分 ４ 个等级 ： 叶片未取食或取食很少 （ 叶片被食的小孔或痕迹很少 ） 记为 “ ＋ ”， 即为 １ 级 ； 叶 片上有一些被食孔但不多 ， 记为 “ ＋＋ ”， 即为 ２ 级 ； 叶片上有许多被食孔但未出现大片叶片被食缺口 ， 记 为 “ ＋＋＋ ”， 即为 ３ 级 ； 叶片大部被食或所剩无几为大量取食 ， 记为 “ ＋＋＋＋ ”， 即为 ４ 级 。 ４ ． ４ ． ３ 　 幼虫生长状况 以目测法观察幼虫生长情况 ， 幼虫没有生长发育记为 “ － ”， 生长发育比正常个体小记为 “ ＋ ／ － ”， 正 常生长记为 “ ＋ ”。 另外 ， 可用分析天平 （ 精确度 １ｍｇ ） 称幼虫体重并计算各处理平均单头幼虫体重 ， 以 幼虫体重比较幼虫生长情况 。 ４ ． ５ 　 鉴定结果计算与分析 每次鉴定均须设置非转基因棉株为对照 。 若对照组幼虫死亡率在 ５％ 以上 ， 处理组的幼虫死亡率 需要进行校正 。 若对照组死亡率超过 ２０％ ， 则需要分析原因 ， 重新进行试验 。 幼虫校正死亡率 犿 ， 数值 以 ％ 表示 ， 按式 （ １ ） 计算 ： 犿 ＝ 犿 ｔ － 犿 ｃ １ － 犿 ｃ × １００ …………………………（ １ ） ２ 犌犅 ／ 犜 ２２１０１ ． １ — ２００８ 　　 式中 ： 犿 ｔ ——— 处理组幼虫死亡率 ； 犿 ｃ ——— 对照组幼虫死亡率 。 计算结果精确到小数点后一位 。 以幼虫校正死亡率 、 取食量 （ 棉花被害程度 ） 和幼虫生长发育情况综合评价转基因棉株对棉铃虫有 无抗虫性和抗虫性程度 。 ５ 　 棉花品种抗棉铃虫性田间网室鉴定 ５ ． １ 　 鉴定方法 采用罩笼接虫法 ， 通过对棉株受害调查 ， 以蕾铃受害率与对照品种相比较评价鉴定材料的抗虫性 级别 。 ５ ． ２ 　 田间罩笼设计 罩笼高 １．８ｍ ， 面积在 ５０ｍ ２ 以上 ， 每品种 ２５ 株 ， 不设重复 ， 以 ＨＧＢＲ８ 为对照品种 ， 罩笼四周设 有保护行 。 罩笼内棉花栽培方式同大田 ， 苗期可以防治棉蚜 ， 防治棉蚜药剂不可影响后期棉铃虫的存 活 ， 后期不防治棉铃虫 。 ５ ． ３ 　 供试虫源和接虫量 供试昆虫为采自田间并经室内饲养的棉铃虫成虫 ， 在养虫笼内任其自由交配 ， 并喂以 ５％ 的蜂蜜 水 。 ３ｄ 后选择活动力强的成虫释放于种植鉴定材料的罩笼内 。 接虫量为每 １０ｍ ２ ４ 对 （ 雌雄比 １∶１ ） 接虫后分别在第 ３ 天 、 第 ７ 天分两次调查卵量 ， 第 ７ 天如果每 １００ 株累计卵量不足 ５００ 粒 ， 要进行补接 卵 ， 每株补足 ５ 粒卵 ， 补接的卵粒用稀浆糊粘接在棉株顶部 。 接卵时期与棉田 ２ 代棉铃虫的发生期一 致 ， 棉花生育期为现蕾或开花结铃期 。 ５ ． ４ 　 调查方法 接虫后第 ７ 天至第 １０ 天和第 １５ 天至第 ２０ 天分两次调查各材料的被害蕾铃数 、 健蕾铃数和顶尖受 害株数 （ 以生长点受害为准 ）， 分别计算蕾铃受害百分率和顶尖受害率 ， 并计算两次调查的均值 。 ５ ． ５ 　 调查结果计算 ５ ． ５ ． １ 　 蕾铃 （ 顶尖 ） 受害率 犱 ， 数值以 ％ 表示 ， 按式 （ ２ ） 计算 ： 犱 ＝ 狀 ｄ 狀 ｔ × １００ …………………………（ ２ ） 　　 式中 ： 狀 ｄ ——— 调查棉株蕾铃 （ 顶尖 ） 被害数 ； 狀 ｔ ——— 调查棉株蕾铃 （ 顶尖 ） 总数 。 计算结果精确到小数点后两位 。 ５ ． ５ ． ２ 　 蕾铃 （ 顶尖 ） 受害减退率 犡 ， 数值以 ％ 表示 ， 按式 （ ３ ） 计算 ： 犡 ＝ 犱 ｃ － 犱 ｔ 犱 （） ｃ × １００ …………………………（ ３ ） 　　 式中 ： 犱 ｃ ——— 对照品种蕾铃 （ 顶尖 ） 受害率 ； 犱 ｔ ——— 鉴定材料蕾铃 （ 顶尖 ） 受害率 。 计算结果精确到小数点后两位 。 ６ 　 抗虫性评价和分级 根据田间网室和室内抗虫性鉴定结果进行鉴定材料抗虫性综合评定 ，