书 书 书犐犆犛 ６７ ． １２０ 犡 ２２ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２２３３８ — ２００８ 动物源性食品中氯霉素类药物 残留量测定 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿狌犾狋犻狉犲狊犻犱狌犲狊狅犳犮犺犾狅狉犪犿狆犺犲狀犻犮狅犾狊 犻狀犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犪犾犳狅狅犱 　　 ２００８  ０９  ０１ 发布 ２００８  １２  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 、 附录 Ｄ 和附录 Ｅ 均为资料性附录 。 本标准由中华人民共和国质量监督检验检疫总局提出 。 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口 。 本标准起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 中华人民共和国山东出入境检验检疫局 。 本标准主要起草人 ： 邱月明 、 林黎明 、 李鹏 、 张鸿伟 、 赵海香 、 董益阳 、 蔡慧霞 、 谢孟峡 、 汪丽萍 、 孔莹 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２２３３８ — ２００８ 动物源性食品中氯霉素类药物 残留量测定 １ 　 范围 本标准规定了动物源性食品中氯霉素类残留量的气相色谱  质谱和液相色谱  质谱 ／ 质谱测定 方法 。 本标准适用于水产品 、 畜禽产品和畜禽副产品中氯霉素 、 氟甲砜霉素和甲砜霉素残留的定性确证和 定量测定 。 ２ 　 气相色谱  质谱法 ２ ． １ 　 原理 样品用乙酸乙酯提取 ， ４％ 氯化钠溶液和正己烷液  液分配净化 ， 再经弗罗里硅土 （ Ｆｌｏｒｉｓｉｌ ） 柱净化 后 ， 以甲苯为反应介质 ， 用 Ｎ ， Ｏ 双 （ 三甲基硅基 ） 三氟乙酰胺  三甲基氯硅烷 （ ＢＳＴＦＡ＋ＴＭＣＳ ， ９９＋１ ） 于 ７０℃ 硅烷化 ， 用气相色谱 ／ 负化学电离源质谱测定 ， 内标工作曲线法定量 。 ２ ． ２ 　 试剂和材料 除非另有说明 ， 在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和二次去离子水或相当纯度的水 。 ２ ． ２ ． １ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ２ ． ２ ． ２ 　 甲苯 ： 农残级 。 ２ ． ２ ． ３ 　 正己烷 ： 农残级 。 ２ ． ２ ． ４ 　 乙酸乙酯 。 ２ ． ２ ． ５ 　 乙醚 。 ２ ． ２ ． ６ 　 氯化钠 。 ２ ． ２ ． ７ 　 氯霉素 （ ＣＡＰ ）、 氟甲砜霉素 （ ＦＦ ）、 甲砜霉素 （ ＴＡＰ ） 标准物质 ： 纯度 ≥ ９９％ 。 ２ ． ２ ． ８ 　 间硝基氯霉素 （ ｍＣＡＰ ） 标准物质 ： 纯度 ≥ ９９％ 。 ２ ． ２ ． ９ 　 氯化钠溶液 （ ４％ ）： 称取适量氯化钠用水配置成 ４％ 的氯化钠溶液 ， 常温保存 ， 可使用 １ 周 。 ２ ． ２ ． １０ 　 氯霉素类标准储备溶液 ： 准确称取适量氯霉素 、 氟甲砜霉素和甲砜霉素标准物质 （ 精确到 ０．１ｍｇ ）， 以甲醇配制成浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 的标准储备溶液 。 ２ ． ２ ． １１ 　 间硝基氯霉素内标工作溶液 ： 准确称取适量间硝基氯霉素标准物质 （ 精确到 ０．１ｍｇ ）， 用甲醇 配制成 １０ｎｇ ／ ｍＬ 的标准工作溶液 。 ２ ． ２ ． １２ 　 氯霉素类基质标准工作溶液 ： 选择不含氯霉素类的样品六份 ， 分别添加 １ｍＬ 内标工作溶液 （ ２．２．１１ ）， 用这六份提取液分别配成氯霉素 、 氟甲砜霉素和甲砜霉素浓度为 ０．１ｎｇ ／ ｍＬ 、 ０．２ｎｇ ／ ｍＬ 、 １ｎｇ ／ ｍＬ 、 ２ｎｇ ／ ｍＬ 、 ４ｎｇ ／ ｍＬ 、 ８ｎｇ ／ ｍＬ 的溶液 ， 按本方法提取 （ ２．４．１ ）、 净化 （ ２．４．２ ）， 制成样品提取液 ， 用氮气缓慢吹干 ， 硅烷化 （ ２．４．３ ） 后 ， 制成标准工作溶液 。 ２ ． ２ ． １３ 　 衍生化试剂 ： Ｎ ， Ｏ 双 （ 三甲基硅基 ） 三氟乙酰胺  三甲基氯硅烷 （ ＢＳＴＦＡ＋ＴＭＣＳ ， ９９＋１ ）。 ２ ． ２ ． １４ 　 固相萃取柱 ： 弗罗里硅土柱 （ ６．０ｍＬ ， １．０ｇ ）。 ２ ． ３ 　 仪器和设备 ２ ． ３ ． １ 　 气相色谱 ／ 质谱联用仪 ： 配有化学电离源 （ ＣＩ ）。 ２ ． ３ ． ２ 　 组织捣碎机 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２２３３８ — ２００８ ２ ． ３ ． ３ 　 固相萃取装置 。 ２ ． ３ ． ４ 　 振荡器 。 ２ ． ３ ． ５ 　 旋转蒸发仪 。 ２ ． ３ ． ６ 　 涡旋混合器 。 ２ ． ３ ． ７ 　 离心机 。 ２ ． ３ ． ８ 　 恒温箱 。 ２ ． ４ 　 测定步骤 ２ ． ４ ． １ 　 提取 称取 １０ｇ （ 精确到 ０．０１ｇ ） 粉碎的组织样品于 ５０ｍＬ 具塞离心管中 ， 加入 １．０ｍＬ 内标溶液 （ ２．２．１１ ） 和 ３０ｍＬ 乙酸乙酯 ， 振荡 ３０ｍｉｎ ， 于 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ２ｍｉｎ ， 上层清液转移至圆底烧瓶中 ， 残 渣用 ３０ｍＬ 乙酸乙酯再提取一次 ， 合并提取液 ， ３５℃ 旋转蒸发至 １ｍＬ ～ ２ｍＬ ， 待净化 。 ２ ． ４ ． ２ 　 净化 ２ ． ４ ． ２ ． １ 　 液  液萃取 提取液浓缩物 （ ２．４．１ ） 加 １ｍＬ 甲醇溶解 ， 用 ２０ｍＬ 氯化钠溶液 （ ２．２．９ ） 和 ２０ｍＬ 正己烷液  液萃 取 ， 弃去正己烷层 ， 水相用 ４０ｍＬ 乙酸乙酯分两次萃取 ， 合并乙酸乙酯相于心形瓶中 ， ３５℃ 旋转蒸发至 近干 ， 用氮气缓慢吹干 。 ２ ． ４ ． ２ ． ２ 　 弗罗里硅土柱净化 弗罗里硅土柱依次用 ５ｍＬ 甲醇 、 ５ｍＬ 甲醇  乙醚 （ ３＋７ ） 溶液和 ５ｍＬ 乙醚淋洗备用 。 将残渣 （ ２．４．２．１ ） 用 ５．０ｍＬ 乙醚溶解上样 ， 用 ５．０ｍＬ 乙醚淋洗 Ｆｌｏｒｉｓｉｌ 柱 ， ５．０ｍＬ 甲醇  乙醚溶液 （ ３＋７ ） 洗 脱 ， 洗脱液用氮气缓慢吹干 ， 待硅烷化 。 ２ ． ４ ． ３ 　 硅烷化 净化后的试样 （ ２．４．２．２ ） 用 ０．２ｍＬ 甲苯溶解 ， 加入 ０．１ｍＬ 硅烷化试剂 （ ２．２．１３ ） 混合 ， 于 ７０℃ 衍 生化 ６０ｍｉｎ 。 氮气缓慢吹干 ， 用 １．０ｍＬ 正己烷定容 ， 待测定 。 ２ ． ４ ． ４ 　 测定 ２ ． ４ ． ４ ． １ 　 气相色谱  质谱条件 ａ ） 　 色谱柱 ： ＤＢ５ＭＳ 毛细管柱 ， ３０ｍ×０．２５ｍｍ （ 内径 ） ×０．２５ μ ｍ ， 或与之相当者 ； ｂ ） 　 色谱柱温度 ： ５０℃ 保持 １ｍｉｎ ， ２５℃ ／ ｍｉｎ 升至 ２８０℃ ， 保持 ５ｍｉｎ ； ｃ ） 　 进样口温度 ： ２５０℃ ； ｄ ） 　 进样方式 ： 不分流进样 ， 不分流时间 ０．７５ｍｉｎ ； ｅ ） 　 载气 ： 高纯氦气 ， 纯度 ≥ ９９．９９９％ ； ｆ ） 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｇ ） 　 进样量 ： １．０ μ Ｌ ； ｈ ） 　 接口温度 ： ２８０℃ ； ｉ ） 　 离子源 ： 化学电离源负离子模式 ＮＣＩ ； ｊ ） 　 扫描方式 ： 选择离子监测 ； ｋ ） 　 离子源温度 ： １５０℃ ； ｌ ） 　 四级杆温度 ： １０６℃ ； ｍ ） 　 反应气 ： 甲烷 ， 纯度 ≥ ９９．９９９％ ； ｎ ） 　 选择监测离子参见表 １ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２２３３８ — ２００８ 表 １ 　 监测离子 药物名称 监测离子 （ ｍ ／ ｚ ） 定量离子 （ ｍ ／ ｚ ） 相对离子丰度比 ／ ％ 允许相对误差 ／ ％ 间硝基氯霉素 ４６６ ４６８ ４７０ ４３２４６６１００ ６６ １６ ２±２０％ ±３０％ ±５０％ 氯霉素 ４６６ ４６８ ３７６ ３７８４６６１００ ７１ ３２ １９±２０％ ±２５％ ±３０％ 氟甲砜霉素 ３３９ ３４１ ４２９ ４３１３３９１００ ７５ ８９ ８４±２０％ ±２０％ ±２０％ 甲砜霉素 ４０９ ４１１ ４９９ ５０１４０９１００ ９３ ９２ ９３±２０％ ±２０％ ±２０％ ２ ． ４ ． ４ ． ２ 　 定性测定 进行试样测定时 ， 如果检出色谱峰的保留时间与标准物质相一致 ， 并且在扣除背景后的样品质谱图 中 ， 所选择的离子均出现 ， 而且所选择离子的相对离子丰度比与标准物质一致 ， 相对丰度允许偏差不超 过表 １ 规定的范围 ， 则可判断样品中存在对应的三种氯霉素 。 如果不能确证 ， 应重新进样 ， 以扫描方式 （ 有足够灵敏度 ） 或采用增加其他确证离子的方式来确证 。 ２ ． ４ ． ４ ． ３ 　 内标工作曲线 用配制的基质标准工作溶液 （ ２．２．１２ ） 按 ２．４．４．１ 的气相色谱  质谱条件分别进样 ， 以标准溶液浓度 为横坐标 ， 待测组分与内标物的峰面积之比为纵坐标绘制内标工作曲线 。 ２ ． ４ ． ４ ． ４ 　 定量 以 ｍ ／ ｚ４６６ （ ｍＣＡＰ 和 ＣＡＰ ）、 ３３９ （ ＦＦ ） 和 ４０９ （ ＴＡＰ ） 为定量离子 ， 样品溶液中氯霉素类衍生物的响 应值均应在仪器测定的线性范围内 。 在上述色谱条件下 （ ２．４．４．１ ）， ｍＣＡＰ 、 ＣＡＰ 、 ＦＦ 、 ＴＡＰ 标准物质 衍生物参考保留时间约为 １１．４ｍｉｎ 、 １１．８ｍｉｎ 、 １２．６ｍｉｎ 、 １３．６ｍｉｎ 。 氯霉素类标准物质衍生物总离子 流图和质谱图参