书 书 书犐犆犛 ７１ ． １００ ． ７０ 犢 ４２ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ８ — ２００９ 化妆品中甲氨嘌呤的测定 高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犲狋犺狅狋狉犲狓犪狋犲犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊犫狔 犺犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿犲狋犺狅犱 ２００９  １１  ３０ 发布 ２０１０  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由中国轻工业联合会提出 。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ２５７ ） 归口 。 本标准负责起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 上海市日用化学工业研究所 、 上海香料研究所 。 本标准主要起草人 ： 王星 、 武婷 、 张庆 、 肖海清 、 席广成 、 马强 、 沈敏 、 康薇 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ８ — ２００９ 引 　　 言 　　 本标准中的被测物质是我国 《 化妆品卫生规范 》 规定的禁用物质 ， 不得作为化妆品生产原料即组分 添加到化妆品中 。 如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时 ， 则化妆品成品应符合 《 化妆品 卫生规范 》 对化妆品的一般要求 ， 即在正常及合理的可预见的使用条件下 ， 不得对人体健康产生危害 。 目前我国尚未规定该物质的限量值 ， 本标准的制定 ， 仅对化妆品中测定该物质提供检测方法 。 Ⅱ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ８ — ２００９ 化妆品中甲氨嘌呤的测定 高效液相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了化妆品中甲氨嘌呤的测定方法 。 本标准适用于化妆品中甲氨嘌呤的测定 。 本标准对于甲氨嘌呤的检出限为 １ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ２．５ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 原理 以流动相  甲醇与 ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸二氢钠 （ ｐＨ５．０ ）（ ３０＋７０ ， ｖ ／ ｖ ） 为溶剂 ， 超声提取 、 离心 ， ０．４５ μ ｍ 的有机滤膜过滤 ， 溶液注入配有二极管阵列检测器 （ ＤＡＤ ） 的液相色谱仪检测 ， 外标法定量 。 ３ 　 试剂和材料 除另有规定外 ， 试剂均为分析纯 。 水为超纯水 。 ３ ． １ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ３ ． ２ 　 四氢呋喃 ： 色谱纯 。 ３ ． ３ 　 甲氨嘌呤 ， 纯度不小于 ９７％ ， ＣＡＳ 编号为 ： ５９０５２ 。 ３ ． ４ 　 甲氨嘌呤标准储备液 ： 准确称取甲氨嘌呤 ０．０５ｇ ， 精确到 ０．０００１ｇ ， 于 ５０ｍＬ 烧杯中 ， 加 １ｍＬ ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠溶液溶解后移入 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用超纯水定容至刻度 ， 即得甲氨嘌呤溶液浓度 为 ５００ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备液 。 储备液在冰箱冷藏保存 ， 可使用两个月 。 ３ ． ５ 　 标准工作溶液 ： 用水将上述标准储备液 （ ３．４ ） 分别配成一系列浓度 ０．０５ｍｇ ／ Ｌ 、 ０．１ｍｇ ／ Ｌ 、 １ｍｇ ／ Ｌ 、 ２ｍｇ ／ Ｌ 、 ５ｍｇ ／ Ｌ 、 １０ｍｇ ／ Ｌ 、 ２０ｍｇ ／ Ｌ 的标准工作溶液 ， 冰箱冷藏保存 ， 可使用一周 。 ３ ． ６ 　 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 的氢氧化钠溶液 ： 称取氢氧化钠 ０．４ｇ ， 精确到 ０．００１ｇ ， 于 ５０ｍＬ 烧杯中 ， 加水溶解后 转移至 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 加水定容至刻度 ， 即得 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 的氢氧化钠溶液 。 ３ ． ７ 　 ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 的磷酸二氢钠 （ ｐＨ５．０ ）： 称取磷酸二氢钠 （ ＮａＨ ２ ＰＯ ４ · ２Ｈ ２ Ｏ ） ３．９ｇ ， 精确到 ０．００１ｇ ， 于 １００ｍＬ 烧杯中 ， 加水溶解转移至 １０００ｍＬ 容量瓶中 ， 加水定容至刻度 ， 即得 ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 的磷酸二氢钠溶液 ， 用 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 的氢氧化钠溶液 （ ３．６ ） 调节 ｐＨ 至 ５．０ 。 ４ 　 仪器 ４ ． １ 　 液相色谱仪 ， 配有二极管阵列检测器 。 ４ ． ２ 　 微量进样器 ， １０ μ Ｌ 。 ４ ． ３ 　 超声波清洗器 。 ４ ． ４ 　 离心机 ， 大于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ４ ． ５ 　 溶剂过滤器和 ０．４５ μ ｍ 有机过滤膜 。 ４ ． ６ 　 具塞比色管 ， １０ｍＬ 。 ５ 　 测定步骤 ５ ． １ 　 样品处理 称取化妆品试样约 ０．２ｇ ， 精确到 ０．００１ｇ ， 于 １０ｍＬ 具塞比色管中 ， 加入 ８ｍＬ 流动相 （ 甲醇 ： １ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ８ — ２００９ ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸二氢钠 （ ｐＨ５．０ ） ＝３０＋７０ ， ｖ ／ ｖ ）， 在超声波清洗器中超声振荡 ２０ｍｉｎ ， 冷却后用流动 相稀释至刻度 ， 混匀 。 取部分溶液放入离心管中 ， 在离心机上于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 ２０ｍｉｎ ， 离心后的上 清液经 ０．４５ μ ｍ 有机滤膜过滤 ， 滤液待测定用 。 对于口红等含蜡质较多的化妆品样品 ， 提取溶剂为四氢呋喃  磷酸二氢钠 （ ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ ， ｐＨ５．０ ） （ １＋１ ， ｖ ／ ｖ ）， 其他步骤同上 。 ５ ． ２ 　 测定 ５ ． ２ ． １ 　 色谱条件 ５ ． ２ ． １ ． １ 　 色谱柱 ： Ｃ １８ 柱 （ ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ 内径 ， ５ μ ｍ ）， 或相当者 ； ５ ． ２ ． １ ． ２ 　 流动相 ： 甲醇 ： ０．０２５ｍｏｌ ／ Ｌ 磷酸二氢钠溶液 （ ｐＨ５．０ ）， ３０＋７０ （ ｖ ／ ｖ ）； ５ ． ２ ． １ ． ３ 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ５ ． ２ ． １ ． ４ 　 柱温 ： ２５℃ ； ５ ． ２ ． １ ． ５ 　 检测波长 ： ３０２ｎｍ ； ５ ． ２ ． １ ． ６ 　 进样量 ： １０ μ Ｌ 。 ５ ． ２ ． ２ 　 标准工作曲线绘制 分别移取 １０ μ Ｌ 浓度为一系列 ０．０５ｍｇ ／ Ｌ 、 ０．１ｍｇ ／ Ｌ 、 １ｍｇ ／ Ｌ 、 ２ｍｇ ／ Ｌ 、 ５ｍｇ ／ Ｌ 、 １０ｍｇ ／ Ｌ 、 ２０ｍｇ ／ Ｌ 的标准工作溶液 ， 按色谱条件 （ ５．２．１ ） 进行测定 ， 以色谱峰的峰面积为纵坐标 ， 对应的溶液浓 度为横坐标作图 ， 绘制标准工作曲线 。 标准物质色谱图参见附录 Ａ 的图 Ａ．１ 。 ５ ． ２ ． ３ 　 试样测定 用微量注射器准确吸取 １０ μ Ｌ 试样溶液 （ ５．１ ） 注入液相色谱仪 ， 按色谱条件 （ ５．２．１ ） 进行测定 ， 记录 色谱峰的保留时间和峰面积 ， 由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的甲氨嘌呤的浓度 。 试样溶 液中的被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内 。 被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流 动相稀释后进行测定 。 ５ ． ２ ． ４ 　 定性确认 液相色谱仪对样品进行定性测定 ， 进行样品测定时 ， 如果检出甲氨嘌呤的色谱峰的保留时间与标准 品相一致 ， 并且在扣除背景后的样品色谱图中 ， 该物质的紫外吸收图谱与标准品的紫外吸收图谱相一 致 ， 则可初步确认样品中存在甲氨嘌呤 。 必要时 ， 阳性样品需用其他方法进行确认试验 。 ５ ． ３ 　 平行试验 按以上步骤 ， 对同一试样进行平行试验测定 。 ５ ． ４ 　 空白试验 除不称取试样外 ， 均按上述步骤进行 。 ６ 　 结果计算 结果按式 （ １ ） 计算 （ 计算结果应扣除空白值 ）： 犡 犻 ＝ 犮 犻 · 犞 犻 犿 …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犡 犻 ——— 样品中甲氨嘌呤的质量浓度 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； 犮 犻 ——— 标准曲线查得甲氨嘌呤的浓度 ， 单位为毫克每升 （ ｍｇ ／ Ｌ ）； 犞 犻 ——— 样品稀释后的总体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犿 ——— 样品质量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 ７ 　 方法检出限与定量限 甲氨嘌呤的检出限为 １ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ２．５ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ８ — ２００９ ８ 　 回收率与精密度 在添加浓度 １ｍｇ ／ ｋｇ ～ ２．５ｍｇ ／ ｋｇ 浓度范围内 ， 回收率在 ８５％ ～ １１０％ 之间 ， 相对标准偏差小 于 １０％ 。 ９ 　 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 １０％ 。 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ８ — ２００９ 书书书 犌犅／犜２４８００．８—２００９ 附　录　犃 （资料性附录） 标准物质的液相色谱图 　　１———甲氨嘌呤（４．３７ｍｉｎ）。 图犃．１　 甲氨嘌呤的标准液相色谱图 ９００２ — ８  ００８４２犜／犅犌