ICS65.150 B51 中华人民共和国国家标准 GB/T26620—2011 钝 吻黄盖鲽 Marbledflounder 2011-06-16发布 2011-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准的附录A为规范性附录,附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。 本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所、中国海洋大学。 本标准主要起草人:张岩、陈四清、刘曼红、沙珍霞、于东祥。 ⅠGB/T26620—2011 钝吻黄盖鲽 1 范围 本标准给出了钝吻黄盖鲽(Pseudopleuronectesyokohamae)的主要形态构造特征﹑生长与繁殖﹑ 细胞遗传学特性、生化遗传学特性及检测方法。 本标准适用于钝吻黄盖鲽的种质检测与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分:抽样方法 GB/T18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分:性状测定 GB/T18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分:染色体组型分析 3 名称与分类 3.1 学名 钝吻黄盖鲽Pseudopleuronectesyokohamae(Günther) 3.2 分类地位 隶属于鲽形目(Pleuronectiformes)、鲽亚目(Pleuronectoidei)、鲽科(Pleuronectidae)、鲽亚科 (Pleuronectinae)、黄盖鲽属(Pseudopleuronectes)。 4 主要形态特征 4.1 外部形态特征 钝吻黄盖鲽体呈卵圆形,背腹缘凸度相似。头部颇小,背面在上眼前缘上方有一凹刻。眼小,均在 右侧。眼间隔颇窄隆起呈嵴状,被鳞。牙颇小而侧扁,顶端略呈截形,呈门牙状,基部粗壮,排列紧密。 下颌较长,突出于前;上颌后端终止于下眼的前缘稍后的下方。有眼侧的前鼻孔接近上颌;无眼侧的前 鼻孔后缘有一片状小瓣,后鼻孔仅为一大圆孔。上鳃盖边缘略呈游离。 鳞颇小,通常有眼侧为栉鳞,无眼侧为圆鳞,有时头部亦兼有弱栉鳞。头部仅吻及上下颌无鳞,眼间 隔满被小型栉鳞。各鳍的鳍条均多少被鳞。左右侧线同等发达,前部在胸鳍上方有一较低的弓状弯曲 部,弯曲部中央至背鳍基底间有鳞22行~26行,直线部起点处至背鳍基底间有鳞32行~37行,侧线前 方的颞上枝甚短。 有眼侧为褐色或黄褐色,有时有大小不等的暗色斑纹散布体部,背鳍及臀鳍上有时亦有暗色斑纹, 尾鳍后缘暗色或黑色。钝吻黄盖鲽的外部形态见图1。 4.2 可数性状 4.2.1 背鳍鳍式:D.69~72 4.2.2 臀鳍鳍式:A.50~53 4.2.3 腹鳍鳍式:V.6 4.2.4 胸鳍鳍式:P.11 4.2.5 侧线鳞鳞式:75~83 1GB/T26620—2011 4.2.6 鳃耙数:3~4+7 4.2.7 牙式:(0+9~13)/(0~2+12~15) 图1 钝吻黄盖鲽的外部形态 4.3 可量性状 可量性状实测比值见表1。 表1 可量性状实测比值 项 目 比 值 体长/体高 2.2~2.4 体长/头长 4.0~4.4 头长/吻长 6.2~7.3项 目 比 值 头长/眼间距 11.7~17.6 头长/眼径 4~5.7 5 生长与繁殖 5.1 生长 5.1.1 不同年龄组的体长与体重 渤海钝吻黄盖鲽不同年龄组的体长、体重实测值见表2。 表2 渤海黄盖鲽不同年龄组的体长、体重实测值 项 目 1龄 2龄 3龄 4龄 5龄 体长/mm 153 212 255 288 318 体重/g 70 183 311 460 600 5.1.2 全长体重实测值 钝吻黄盖鲽全长与体重的实测值见表3。钝吻黄盖鲽生长方程和体长体重关系参见附录B。 表3 钝吻黄盖鲽全长与体重的实测值 全长/cm 4.24.54.64.75.15.25.45.76.06.46.6 体重/g 1.61.7 2 2.12.12.22.53.33.63.94.3 全长/cm 6.77.07.28.111.212.413.013.515.115.216.2 体重/g 4.85.25.57.918.02426.030.036.038.048 全长/cm16.617.217.818.618.718.819.620.5 体重/g 62 72 78 86 88 98114126 2GB/T26620—2011 5.2 繁殖 5.2.1 性成熟年龄 雄鱼2龄性腺开始成熟,雌鱼3龄性腺才开始成熟。 5.2.2 产卵期 黄渤海黄盖鲽的繁殖季节在3月至5月,4月上旬为盛期。一年性成熟一次,一次性产卵。 5.2.3 繁殖力 钝吻黄盖鲽产卵个体的繁殖力波动在14.6×104粒~204×104粒,平均为78.25×104粒。 6 细胞遗传学特性 钝吻黄盖鲽染色体数目为2n=48,核型为2n=48t。 钝吻黄盖鲽的染色体核型图见图2。 图2 钝吻黄盖鲽染色体核型 7 生化遗传学特性 7.1 同工酶图谱 钝吻黄盖鲽的异柠檬酸脱氢酶(IDHP)电泳图谱见图3。 图3 钝吻黄盖鲽异柠檬酸脱氢酶电泳图谱 7.2 群体变异范围 钝吻黄盖鲽群体多态位点比例(P99)为0.2353,杂合度观察值(Ho)为0.0196,平均有效等位基因 数(Ne)为0.0181。 8 检测方法 8.1 抽样方法 抽样方法按照GB/T18654.2的规定执行。 8.2 性状测定 性状测定按照GB/T18654.3的规定执行。 3GB/T26620—2011 8.3 繁殖力的测定 用天平或杆秤称产卵前、后雌亲鱼的重量,前后两次称重之差即为产卵的重量。用电子天平称刚产 出的卵1.0g左右,在解剖镜下计数,平行两次,平均值为卵密度(粒/g)。产卵量按式(1)计算: G=(W1-W2)(n1/2w样1+n2/2w样2)…………………………(1) 式中: G———产卵量,单位为粒; W1———产卵前亲鱼重量,单位为克(g); W2———产卵后亲鱼重量,单位为克(g); n1———试样1的卵粒数,单位为粒; w样1———试样1重量,单位为克(g); n2———试样2的卵粒数,单位为粒; w样2———试样1重量,单位为克(g)。 8.4 染色体及核型 染色体及核型的测定按照GB/T18654.12的规定执行。 8.5 同工酶分析 8.5.1 样品制备 活体或低温样品带回实验室。取肌肉和肝脏,密封放入超低温冰箱(-76℃)或液氮罐中贮存。将 部分组织(约0.5g)取出放入玻璃匀浆器中,加入等体积双蒸水或1∶1(质量体积)的0.1mol/L磷酸 缓冲液(pH7.0)(配制方法见附录A),冰水浴中匀浆后,倒入1.5mL离心管内,在0~4℃冷冻离心机 中15000r/min,离心15min,离心后取上清液作为电泳样品。 8.5.2 电泳分析 采用淀粉凝胶电泳方法,凝胶浓度为12%,电泳缓冲系统为TC,pH7.0(配制方法见附录A),恒流 (电压大小为8V/cm)电泳5h~6h。电泳过程在4℃冰箱中进行。凝胶厚度为6mm,电泳后切成 4片~5片,分别进行各种酶的染色,染色过程在37℃恒温箱中进行,染色液配方见附录A。 8.5.3 结果计算 群体遗传学特征的数据是对蓬莱沿岸33尾样品的肌肉、心脏、眼和肝胰腺4种组织中的天冬氨酸 转氨酶(AAT)、乙醇脱氢酶(ADH)、6-磷酸葡萄糖异构酶(GPI)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)、异柠 檬酸脱氢酶(IDHP)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、甘露糖-6-磷酸异构酶(MPI)、6-磷酸 葡萄糖脱氢酶(PGDH)、磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、山梨醇脱氢酶(SDH)和超氧化物歧化酶(SOD) 12种同工酶的检测结果。 多态位点比例(P)、平均杂合度观察值(Ho)、平均有效等位基因数(Ne)分别按式(2)、式(3)、式(4) 计算: P=N1/n×100% …………………………(2) 式中: P———多态位点比例; N1———多态位点数; n———检测位点总数。 Ho=(∑H1)/n …………………………(3) 式中: Ho———平均杂合度观察值; H1———多态位点杂合度观察值; n———观察位点总和。 Ne=[∑(1-Ho)]/n …………………………(4) 4GB/T26620—2011 式中: Ne———平均有效等位基因数; Ho———平均杂合度观察值; n———观察位点总和。 9 判定规则 被检样品符合本标准的第4章、第6章要求的为合格样品。如果有一章不符合的可以复检,复检不 合格的判定为不合格,复检合格的判定为合格。 5GB/T26620—2011 附 录 A (规范性附录) 各种缓冲液、染色液配方 A.1 TC缓冲液 三羟甲基氨基甲烷(Tris)3.028g,用柠檬酸调整pH至7.0,蒸馏水定容至1L。 A.2 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.0) 1mol/L磷酸氢二钾(K2HPO4)61.5mL,1mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)38.5mL,用水稀释至 1000mL。 A.3 辅酶Ⅱ(NADP)基本保存液 NADP(N-0505):300mg,噻唑蓝(MTT)(M-2128):300mg,纯水:1000mL。 A.4 辅酶Ⅰ(NAD)基