ICS65.150 B52 中华人民共和国国家标准 GB/T27520—2011 暗 纹东方鲀 Obscurepuffer 2011-11-21发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会(SAC/TC156/SC1)归口。 本标准起草单位:江苏中洋集团股份有限公司、上海海洋大学。 本标准主要起草人:钱晓明、李家乐、赵金良、秦桂祥、卢玉平、郭正龙。 ⅠGB/T27520—2011 暗纹东方鲀 1 范围 本标准给出了暗纹东方鲀(Takifugufasciatus)的主要形态结构特征、生长与繁殖、生化遗传特性 和检测方法。 本标准适用于暗纹东方鲀的种质检测与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T18654.1 养殖鱼类种质检验 第1部分:检验规则 GB/T18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分:抽样方法 GB/T18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分:性状测定 GB/T18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分:染色体组型分析 3 名称与分类 3.1 学名 暗纹东方鲀 Takifugufasciatus(McClland,1844)。 3.2 分类地位 鲀形目(Tetraodontiformes),鲀科(Tetraodontidae),东方鲀属(Takifugu)。 4 主要形态结构特征 4.1 外形特征 4.1.1 形态 体呈亚圆筒形,前端钝圆,向后渐狭小,尾柄略为侧扁。胸鳍宽短,无腹鳍,背鳍后位,与臀鳍相对, 同形,尾鳍后缘稍圆形。口小,端位。体棕褐色,体侧下方具淡黄色带,腹面白色。体色和条纹随体长不 同而有变异。背部具不明显暗褐色横纹4条~6条,横纹之间具白色狭纹3条~5条。胸鳍后上方体侧 处具1圆形黑色大斑,边缘白色。背鳍基部具1长圆形黑色大斑。胸鳍基底外侧和里侧常各具1黑斑。 胸鳍、背鳍、臀鳍黄棕色,尾鳍后端灰褐色。头部及体背、腹面均被小刺,背刺区与腹刺区在眼后部相连。 吻侧、鳃孔后部体侧及尾柄光滑无刺。暗纹东方鲀的外形见图1。 1GB/T27520—2011 图1 暗纹东方鲀外形 4.2 可数性状 4.2.1 背鳍鳍式:D.15~18。 4.2.2 臀鳍鳍式:A.13~16。 4.2.3 胸鳍鳍式:P.16~18。 4.3 可量性状 暗纹东方鲀可量性状比例值见表1。 表1 暗纹东方鲀可量性状比例值 体长/体高 体长/头长 头长/吻长 头长/眼径 头长/眼间距 尾柄长/尾柄高 3.5~3.7 3.2~3.8 2.9~3.1 6.7~7.8 1.5~2.0 1.5~1.7 4.4 内部特征 4.4.1 齿 颌与齿愈合,上、下各1对板状齿。 4.4.2 脊椎骨 脊椎骨数目为:21块~24块。 5 生长与繁殖 5.1 生长 体长与体重关系参见附录A。 5.2 繁殖 5.2.1 性成熟年龄 雌鱼性成熟年龄3龄~4龄,雄鱼性成熟年龄2龄~3龄。 2GB/T27520—2011 5.2.2 产卵特点 暗纹东方鲀为一次产卵型鱼类。绝对怀卵量1.0×105粒~5.0×105粒。长江中下游地区产卵期 在4月上旬至6月下旬,5月为盛期。 5.2.3 卵子特征 粘性卵,淡黄色,半透明,圆球形,卵径0.9mm~1.1mm,卵膜厚,有弹性,具油球,附着在基质上。 6 遗传学特性 6.1 细胞遗传学特性 体细胞染色体数为:2n=44。核型公式:10m+6sm+8st+20t。染色体组型见图2。 图2 暗纹东方鲀染色体组型 6.2 生化遗传学特性 肌肉组织乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱见图3。 图3 暗纹东方鲀肌肉乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱及扫描图 3GB/T27520—2011 7 检测方法 7.1 抽样方法 按GB/T18654.2的规定执行。 7.2 年龄的鉴定 采用脊椎骨年龄鉴定法和鳃盖骨年龄鉴定法。 7.2.1 脊椎骨年龄鉴定法 7.2.1.1 取材 取靠近头部的脊椎骨5块左右。 7.2.1.2 处理与观察 处理与观察步骤如下: a) 将去肉脊椎骨置于水中煮沸5min; b) 剔弃脊椎骨附着的脂肪和杂物; c) 3%氢氧化钾(KOH)溶液浸泡48h; d) 水洗烘干; e) 用解剖镜观察锥体中央斜凹面上的轮纹,以此确定鱼的年龄。 7.2.2 鳃盖骨年龄鉴定法 7.2.2.1 取材 取出新鲜鱼体。 7.2.2.2 处理与观察 处理与观察步骤如下: a) 用开水烫1次~2次; b) 洗净、去除附着物; c) 浸于甘油中10min~15min,然后加热到甘油沸点,骨片即变成乳白色; d) 用解剖镜观察白色宽层与暗黑色窄层组成的年轮,以此确定鱼的年龄。 7.3 主要形态结构特征测定 按GB/T18654.3的规定执行。 7.4 细胞遗传学特性的检测 按GB/T18654.12的规定执行。 7.5 生化遗传学特性的检测 7.5.1 样品的采集与制备 取活体暗纹东方鲀背部肌肉1g,用0.7%生理盐水清洗,加入3%的辅酶Ⅰ(NAD)溶液3mL,置 4GB/T27520—2011 匀浆器中匀浆,将匀浆液于4℃、12000r/min离心30min,取上清液,重复以上离心过程至上清液 澄清。 7.5.2 聚丙烯酰胺凝胶制备 将混匀的4%聚丙烯酰胺凝胶配方溶液,立即灌注到凝胶模具中,聚合反应结束后,取出凝胶,放在 保湿盒内备用。4%聚丙烯酰胺凝胶配方溶液及其制备见附录B中的B.1。 7.5.3 电泳分离 电极缓冲液为TC电极缓冲液,配制方法见附录B中的B.2。 预电泳:将预先制备的聚丙烯酰胺凝胶放在冷却板上,在50mA电流下,电泳30min。 前电泳:预电泳结束后,用微量加样器在凝胶的点样槽中加入8μL的样品,在25mA电流下, 电泳10min。 正式电泳:在电压275V下连续电泳2h。 7.5.4 染色 电泳结束后,取出聚丙烯酰胺凝胶,放入预先配好并在37℃恒温箱中保温的染色液中染色。乳酸 脱氢酶(LDH)同工酶的染色液配制见附录B中的B.3。 8 检验规则与结果判定 按GB/T18654.1的规定执行。 5GB/T27520—2011 附 录 A (资料性附录) 养殖暗纹东方鲀体长与体重关系 体长与体重关系见式(A.1): W=0.0436L2.9516(R2=0.9456)…………………………(A.1) 式中: W———鱼体体重,单位为克(g); L———鱼体体长,单位为厘米(cm)。 6GB/T27520—2011