GB-T 40174-2021 工具酶纯度的检测方法

ICS 07.080 CCS C 27 中华人民共和国国家标准 GB/T 40174—2021 工具酶纯度的检测方法 Purity detection method of reagent enzymes 2021-05-21发布 2021-12-01实施国家市场监督管理总局发布国家标准化管理委员会 GB/T 40174—2021 前言本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任，本文件由全国工具酶标准化工作组（SAC/SWG11)提出并归口。本文件起草单位：福建南生科技有限公司、夏禾（深圳）生物技术有限公司、苏州坤琪生物科技有限公司、上海鹰姿生命科技有限公司、雷谷（厦门）生物医药有限公司、福建华灿制药有限公司、厦门大学安琪酵母股份有限公司、山东大学、北京化工大学、复旦大学，中国科学院微生物研究所、深圳华因康基因科技有限公司。本文件主要起草人：黄发灿、詹学雄、郑登忠、赵晶、朱力、钟江、张永有、姚鹃、陈秀兰、陈劲春、刘文军、郭延巍。 1 GB/T40174—2021 工具酶纯度的检测方法 1范围本文件描述了工具酶纯度检测方法的术语和定义、原理、试剂或材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、结果计算及质量控制。本文件适用于工具酶纯度的检测。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 YY/T0087电泳装置 3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 3.1 工具酶纯度 purityofreagentenzymes 自标工具酶在样品总蛋白质或固含物中所占的质量百分比 3.2 蛋白质含量 contentofprotein 样品经福林酚法测定出每毫克或每毫升样品中的蛋白质所占的质量。 3.3 固含物含量量content of solid 样品烘干后获得的无水固体物质在每毫克或每毫升样品中所占的质量。 4原理用牛血清白蛋白标准品作对照，对样品经干二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳后的胶带进行扫面，再进行灰度值计算，获得样品中目标工具酶的质量，再采用福林酚法测定样品总蛋白质的质量或用炽灼残渣检查法测定样品固含物含量，从而计算出工具酶纯度 C 试剂或材料除非另有规定，所用的试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 5.1碱性铜溶液称取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400mL使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50mL使 1 GB/T40174—2021 溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30mL使溶解，将两液混合作为乙液。临用前，甲液、乙液按50：1（体积比）混合。 5.2福林酚溶液称取钨酸钠100g、钼酸钠25g，加水700mL、85%磷酸50mL与盐酸100mL，置磨口圆底烧瓶中，缓缓加热回流10h，放冷，再加硫酸锂150g、水50mL和溴数滴，加热煮沸15min，冷却，加水稀释至1000mL，过滤，滤液作为贮备液，置棕色瓶中。临用前加一倍的水，摇匀，即得。 5.3标准溶液的配制准确称取牛血清白蛋白标准品适量，用合适的溶液溶解制成1mg/mL的标准溶液。取丙烯酰胺30.0g，Acr-Bis0.8g，溶于水，定容到100mL。用0.45μm微孔滤膜过滤，储于棕色瓶，宜4℃避光保存。 5.50.5mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCI)缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷6.05g，加适量水使溶解，用盐酸调pH值至6.8，加水定容至100mL，宜 4℃保存。 5.61.5mol/L的Tris-HCI缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.8，加水定容至100mL，宜4℃ 保存。 5.710%的SDS溶液称取2.5gSDS，加适量水溶解，定容至25mL，室温保存备用。 5.810%过硫酸铵溶液称取1.0g过硫酸铵，加适量水溶解，定容至10mL，宜现配现用。 5.9样品缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷0.152g、溴酚蓝1mg、SDS0.4g，甘油2mL，用盐酸调pH值至6.8,加水酰胺凝胶电泳，则再加β-巯基乙醇1mL。 5.10电泳缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷3g、甘氨酸14.4g、SDS1.0g，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.3,加水稀释至1000mL。 5.11固定液称取三氯醋酸5g，加水200mL溶解后，加甲醇200mL，再加水定容至500mL。 5.12染色液称取1.0g考马斯亮蓝R250，加入甲醇200mL、冰醋酸50mL，加水定容至250mL，混匀。 2