ICS 07.080 CCS A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 38479—2021 壳聚糖含量测定 高效液相色谱法 Determination of chitosan content-High performance liquid chromatography 2021-12-31发布 2022-07-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T38479—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任， 本文件由中国标准化研究院提出并归口。 本文件起草单位：中国科学院烟台海岸带研究所、中国科学院海洋研究所、山东陆海蓝圣生物科技 股份有限公司、山东卫康生物医药科技有限公司、青岛科技大学、中国标准化研究院、中国科学院过程工 程研究所。 本文件主要起草人：郭占勇、董方、秦松、苗芹、秦荣基、崔玉琳、李鹏程、杨锡洪、李进国、邢荣娥、 马爱进、陈军、黄永东。 SAC 1 GB/T 38479—2021 壳聚糖含量测定 高效液相色谱法 1范围 本文件规定了用高效液相色谱法测定壳聚糖含量的方法。 本文件适用于壳聚糖含量的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 壳聚糖 chitosan 甲壳素脱去N-乙酰基55%以上的物质。 4原理 壳聚糖乙酰化制备成甲壳素后进行酸水解，高效液相色谱法检测水解液中氨基葡萄糖盐酸盐的浓 度，外标法定量计算得到样品中壳聚糖的含量。 5 试剂或材料 5.1水 GB/T6682规定的一级水。 5.2 2乙腈 色谱纯。 5.3 3盐酸 质量分数36%~38% 5.4氮气 纯度≥99.9%。 5.5 氨基葡萄糖盐酸盐 纯度≥99%。 1 GB/T38479—2021 5.6乙腈-水溶液 量取800mL乙睛和200mL水，混合均匀。 5.7 氨基葡萄糖盐酸盐标准品溶液 称取氨基葡萄糖盐酸盐标准品1.0g，加水溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成质量浓度为 10mg/mL的储备溶液。分别量取储备溶液适量，稀释定容至10mL容量瓶中，得到一系列质量浓度为 1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL3.0mg/mL3.5mg/mL的氨基葡萄糖盐酸盐标准 品溶液。 6仪器设备 6.1高效液相色谱仪：配有蒸发光散射检测器。 6.2色谱柱：氨基柱（250mmX4.6mm，5μm）。 6.3有机相微孔滤膜：0.45μm。 6.4电子分析天平：感量为0.1mg、0.01g。 6.5电热恒温鼓风干燥箱。 6.6粉碎机。 6.70.3mm标准检验筛。 6.8恒温磁力搅拌器。 6.9 9集热式磁力恒温搅拌器。 6.10旋转蒸发仪。 7测定步骤 7.1 样品预处理 称取壳聚糖样品1kg，用粉碎机粉碎，过0.3mm标准检验筛，“四分法”采样至50g，置于60℃电 热恒温鼓风干燥箱中干燥至恒重。 7.2样品中氨基葡萄糖的含量（w,）测定 称取壳聚糖样品1.0g，加10mL水溶解，过滤，滤液中滴加0.1mL12mol/L盐酸，过0.45μm有 机相微孔滤膜，进样检测。 样品中的氨基葡萄糖含量按式（1）计算： 22C .(1) miXMz 式中 样品中的氨基葡萄糖含量，%； 由标准曲线查得的氨基葡萄糖盐酸盐的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； P1 Vi 溶液体积，单位为毫升（mL）： M.i 氨基葡萄糖的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）； 样品质量，单位为毫克（mg）； Mt2- 氨基葡萄糖盐酸盐的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 2